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技术文章
总胆固醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书 微量法 100T/96S
点击次数：2829 发布时间：2020/9/18 11:05:05
总胆固醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
TC 包括游离胆固醇和胆固醇酯。TC 是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。
测定原理：
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯
转化为 FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和 H2O2；后利用
过氧化物酶催化 H2O2氧化 4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在 500nm 有特征吸
收峰，其颜色深浅与 TC 含量成正比。
自备仪器和用品：
水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配置：
试剂一：异丙醇 100mL（自备）；
TC 工作液：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
TC 标准品：液体 1mL×1 支，5μmol/mL，4℃保存。
TC 的提取：
1、 组织中 TC 的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取
约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清，即 TC
待测液。
2、细胞、细菌中 TC 的提取：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL
试剂一，超声波破碎 1min（强度 20％，超声 2s，停 1s），8000g 4℃离心 10min，取上清，
即 TC 待测液。
3、血清（浆）等样品：直接测定。
测定操作：
1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 500 nm，蒸馏水调零。
2. TC 工作液置于 37℃水浴 30min。
3. 标准管：在在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入 4 μL TC 标准品和 196μLTC 工作液，
迅速混匀，5min 后于 500nm 处比色，记为 A1。
4. 测定管：在在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入 4 μL TC 待测液和 196μLTC 工作液，
迅速混匀，5min 后于 500nm 处比色，记为 A2。
注意：标准管只需测定一次。
计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 血清（浆）中 TC 含量计算：
TC（μ mol /dL）=C 标准液×A 测定管÷A 标准管×100 mL=500×A 测定管÷A 标准管
C 标准液：5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 组织中 TC 含量计算：
(1)按样本蛋白浓度计算
TC（μ mol / mg prot）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷Cpr
= 5×A 测定管÷A 标准管÷Cpr
(2)按样本质量计算
TC（μ mol / g）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷W
= 5×A 测定管÷A 标准管÷W
C 标准液：5μmol/mL；样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g/mL
3. 细胞、细菌中 TC 含量计算：
TC（μ mol /104
cell）=C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（104
cell /L）
=5×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（104
cell /L）
C 标准液：5μmol/mL。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
1. 血清（浆）中 TC 含量计算：
TC（μ mol /dL）=C 标准液×A 测定管÷A 标准管×100 mL=500×A 测定管÷A 标准管
C 标准液：5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 组织中 TC 含量计算：
(1)按样本蛋白浓度计算
TC（μ mol / mg prot）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷Cpr
= 5×A 测定管÷A 标准管÷Cpr
(2)按样本质量计算
TC（μ mol / g）= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷W
= 5×A 测定管÷A 标准管÷W
C 标准液：5μmol/mL；样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g/mL
3. 细胞、细菌中 TC 含量计算：
TC（μ mol /104
cell）=C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（104
cell /L）
=5×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞（104
cell /L）
C 标准液：5μmol/mL。
注意事项：
低检出限为 1mmol/L。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
