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技术文章
谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒说明书 微量法 100 管/96 样
点击次数：2789 发布时间：2020/9/17 8:31:20
谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一，
而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu 还是
味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料。
测定原理：
利用专用提取液提取，然后用显色剂进行显色，显色后在 570nm 下进行测定。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、
蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体 120mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶， 4℃保存；临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解混匀，用不完的试剂仍 4℃
保存。
谷氨酸提取：
1、细菌或培养细胞样品：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞
数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL
试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
次）；8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组
织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）或细胞培养液样品：按照血清（浆）或细胞培养液体积（mL）：试剂一体积
(mL)为 1：5~10 的比例（建议取 0.1mL 血清（浆）或者细胞培养液加入 1mL 试剂一），进
行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。
2、 在有盖 EP 管中加入下列试剂：
试剂名称（μL） 测定管 对照管
样本 250
试剂一 250
试剂二 50 50
混匀，90℃水浴 20min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却，取 200uL 至微量石英比色皿
或 96 孔板中，于 570nm 波长处记录吸光值 A。△A=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一
管。
注意事项：
为提检测灵敏度，测定管的吸光值应小于 1，若大于 1 则需要将上清液用试剂一稀释至适
当倍数后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。
谷氨酸含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0328x- 2.423； x 为谷氨酸含量（µg/mL），y 为吸光值。
2、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2）=304.9×(△A+2.423)
3、按照蛋白浓度计算
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr
4、按照样本质量计算
谷氨酸含量(µg/g 鲜重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W
5、按照细菌或细胞密度计算
谷氨酸含量(μg/104
cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423)
V1：加入反应体系中样本体积，0.25mL；V2：加入提取液体积，1 mL；V3：加入血清（浆）
或细胞培养液体积，0.1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细
菌或细胞总数，500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0164x- 2.423； x 为谷氨酸含量（µg/mL），y 为吸光值。
2、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0164×V1]÷(V3×V1÷V2）=609.8×(△A+2.423)
3、按照蛋白浓度计算
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0164×V1]÷(V1×Cpr)=60.98×(△A+2.423) ÷Cpr
4、按照样本质量计算
谷氨酸含量(µg/g 鲜重)= [(△A +2.423)÷0.0164×V1]÷(W ×V1÷V2)=60.98×(△A+2.423) ÷W
5、按照细菌或细胞密度计算
谷氨酸含量(μg/104
cell)=[(△A +2.423)÷0.0164×V1]÷(500×V1÷V2)=0.122×(△A+2.423)
V1：加入反应体系中样本体积，0.25mL；V2：加入提取液体积，1 mL；V3：加入血清（浆）
或细胞培养液体积，0.1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细
菌或细胞总数，500 万。
注意：该试剂盒仅适用于发酵液或组织中谷氨酸含量测定，检测下限为 70µg/mL。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
