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技术文章
植物氨态氮试剂盒说明书 微量法 100T/96S
点击次数：2708 发布时间：2020/9/16 9:19:23
植物氨态氮试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
氮素是构成生物体的一种必需元素，自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮气
被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮，经过硝化微生物的作用转化成硝态
氮，后者被植物或微生物同化成有机氮化物，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
测定原理
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的 α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成
醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，
缩合生成蓝紫色物质，在 580nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
样本处理
按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）
加入提取液，室温匀浆后于 25℃，12000g 离心 10min，取上清待测。
测定操作表
空白管 测定管
样本（μL） 40
蒸馏水（μL） 40
试剂一（μL） 60 60
试剂二（μL） 10 10
充分混匀，沸水浴 5min 后自然冷却 10min
试剂三（μL） 100 100
充分混匀，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 580nm 处吸光值 A，△A=A 测定管-A 空
白管
注意：空白管只需测定一次。
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.1535x-0.0279，R
2
=0.9993
NH4
+—N 含量（μg/g）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
= 32.9×（△A+0.0397）÷W
V 反总：反应总体积，0.21mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.04mL；V 样总：加入
提取液体积，1mL，W：样本质量，g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0768x-0.0279，R
2
=0.9993
NH4
+—N 含量（μg/g）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
= 65.8×（△A+0.0397）÷W
V 反总：反应总体积，0.21mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.04mL；V 样总：加入
提取液体积，1mL，W：样本质量，g
注意事项
1. 提取好的待测液尽快测定，低温保存不得超过 24 小时。
2. 沸水浴时间不宜过长，否则会对测定结果有影响。
3. 显色后 20min 内完成测定。
4. 低检出限为 18μg/g。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
