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技术文章
土壤硝态氮试剂盒说明书 微量法 100T/96S
点击次数：2741 发布时间：2020/9/16 9:18:41
土壤硝态氮试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。
土壤中硝态氮是等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。
测定原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）
呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。
自备实验用品及仪器
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、振荡仪。
试剂组成和配制
试剂一：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前根据用量每支加 1mL 浓硫酸充分溶解。
试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
样本处理
按照土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 新鲜土样，加入
1mL 蒸馏水）加入蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取 1h，25℃，10000g 离心 10min，取上清
待测。
测定操作表
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 410nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管 测定管
样本（μL） 4
蒸馏水（μL） 4
试剂一（μL） 8 8
充分混匀，25℃静置 30min
试剂二（μL） 190 190
混匀，25℃静置 5min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 410nm 处吸光值 A，
△A=A 测定管-A 空白管
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.633x-0.0397，R
2
=0.9997
NO3
—— N 含量（mg/kg）=（△A+0.0397）÷ 0.633×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
=79.78×（△A+0.0397）÷W
V 反总：反应总体积，0.202mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.004mL；V 样总：加
入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.3165x-0.0397，R
2
=0.9997
NO3
—— N（mg/kg）=（△A+0.0397）÷ 0.3165×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
=159.6×（△A+0.0397）÷W
V 反总：反应总体积，0.202mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.004mL；V 样总：加
入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
注意事项
1. 硝酸根不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很容易在土壤内部移动，所以测定此指标时应
注意采样深度一致。
2. 土壤经风干或者烘干很容易引起 NO3
—— N 的变化，所以好采用新鲜土壤进行测定，
以准确反映该指标含量。
3. 试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。
4. 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
5. 低检出限为 62.7μg/kg
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
