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技术文章
土壤铵态氮试剂盒说明书 微量法 100T/96S
点击次数：2701 发布时间：2020/9/16 9:17:55
土壤铵态氮试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
土壤中的铵态氮可被土壤胶体吸附，呈交换性铵状态氮肥，也可溶解在土壤溶液中，能直接
被植物吸收利用，属于速效性氮素。
测定原理
土壤中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，在 625nm
处有特征吸收峰，吸光值与铵态氮含量成正比。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、振荡仪。
试剂组成和配制
提取液：液体 110mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加 4mL 双蒸水溶解，现配现用。
试剂二：液体 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 2mL×1 瓶，4℃保存。
样本处理
按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 新鲜土样，加入
1mL 提取液），振荡提取 1h，10000g ，25℃离心 10min，取上清液待测。
测定操作表
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 625nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管 测定管
样本（μL） 20
提取液（μL） 20
试剂一（μL） 80 80
试剂二（μL） 80 80
充分混匀，25℃静置 1h
试剂三（μL） 20 20
充分混匀，于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸馏水调零，测定 625nm 处吸光值 A，分别
记为 A 空白管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 空白管
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.3672x-0.0377，R
2
= 0.9993
NH4
+—N 含量（mg/kg）=（△A+0.0377）÷ 0.3672×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
= 27.23×（△A+0.0377）÷W
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提
取液体积，1mL，W：样本质量，g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1836x-0.0377，R
2
= 0.9993
NH4
+—N 含量（mg/kg）=（△A+0.0377）÷ 0.1836×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
= 54.46×（△A+0.0377）÷W
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提
取液体积，1mL，W：样本质量，g
注意事项
1. 试剂一必须避光低温保存，配制好的试剂一 4℃保存不能超过 20 天。
2. 浸提液好在当日完成测定，如果不能完成，可冷冻保存，但不能超过两天。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
