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技术文章
植物硝态氮试剂盒说明书 微量法 100T/96S
点击次数：2739 发布时间：2020/9/16 9:17:16
植物硝态氮试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硝态氮是植物主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为
土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且
对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
测定原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）
呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。
自备实验用品及仪器
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴
锅。
试剂组成和配制
试剂一：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加 1mL 浓硫酸充分溶解。
试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 支，4℃保存。
样本处理
按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 蒸馏水）
加入蒸馏水，室温匀浆后置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min，期间不断晃动或者置于 90℃
恒温摇床中振荡提取 30min，待冷却后于 25℃，12000g 离心 15min，取上清待测。（深色植
物匀浆后加入约 3mg 试剂三后再提取）
测定操作表
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 410nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管 测定管
样本（μL） 4
蒸馏水（μL） 4
试剂一（μL） 8 8
充分混匀，25℃静置 30min
试剂二（μL） 190 190
混匀，25℃静置 5min，于微量石英比色皿/96 孔板中测定 410nm 处吸光值 A，
△A=A 测定管-A 空白管
注意：空白管只需测定一次。
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.633x-0.0397，R
2
=0.9997
NO3
—— N 含量（μg/g）=（△A+0.0397）÷ 0.633×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
=79.78×（△A+0.0397）÷W
V 反总：反应总体积，0.202mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.004mL；V 样总：加
入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.3165x-0.0397，R
2
=0.9997
NO3
—— N（μg/g）=（△A+0.0397）÷ 0.3165×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
=159.6×（△A+0.0397）÷W
V 反总：反应总体积，0.202mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.004mL；V 样总：加
入提取液体积，1mL，W：样本质量，g
注意事项
1. 试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。
2. 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
3. 低检出限为 62.8μg/g。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
