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技术文章
食品中亚硝酸盐含量测定试剂盒说明书 微量法 100T/96S
点击次数：2736 发布时间：2020/9/16 9:15:28
食品中亚硝酸盐含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
在食品中，亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更安定，在食品加工业中作为保色剂，以维
持肉制品的良好外观，并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生，提食用肉制品的安全，但是人体
长期摄入亚硝酸盐过量的食品，可诱发消化系统癌变。
测定原理：
在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与 N-1-萘基乙二胺形成
紫红色偶氮化合物，在 540nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器：
天平、研钵或匀浆器、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液一：液体 50 mL×1 瓶，室温保存。
提取液二：液体 50 mL×1 瓶，室温保存。
提取液三：液体 50 mL×1 瓶，室温保存。
粉剂四：粉剂 100 mg ×1 支，室温保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
样品处理：
称取样品约 0.5 g，破碎，加入 0.5 mL 提取液一，沸水浴 15min，冷却至室温，加入 0.5 mL
提取液二，震荡摇匀，加 0.5 mL 提取液三，用镊子加少量粉剂四（约 1 mg），静置 30min，
25℃，8000g 离心 15 min，取上清液待测。
测定步骤和操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管 测定管
样品（µL） 100
试剂一（µL） 100 100
试剂二（µL） 100 100
H2O 100
混匀，25℃静置 15min，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中检测 540nm 处吸光值。
ΔA=A 测定-A 空白
注意：空白管只需测定一次。
亚硝酸盐含量计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为：y= 0.011x + 0.0216，R
2
= 0. 9991
NO2
-（μ moL/g）=（ΔA - 0.0216）÷0.011×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3
=0.409×（ΔA - 0.0216）÷W
V 样总：加入提取液体积，1.5 mL；V 反总：反应总体积，0.3 mL；V 样：反应中样品体积，
0.1mL；W：样品质量，g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为：y= 0.0055x + 0.0216，R
2
= 0. 9991
NO2
-（μ moL/g）=（ΔA - 0.0216）÷ 0.0055×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3
=0.818×（ΔA - 0.0216）÷W
V 样总：加入提取液体积，1.5 mL；V 反总：反应总体积，0.3 mL；V 样：反应中样品体积，
0.1mL；W：样品质量，g。
注意事项：
1. 试剂盒 2-8℃保存。
2. 试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。
3. 若检测出得 OD 值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释（A540 <0.01 浓
缩，A540 > 2.8 适当稀释）。
4. 低检出限为 1.97μ moL/g
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
