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技术文章
维生素 E（Vitamin E，VE）试剂盒说明书 分光光度法 50 管/24 样
点击次数：2708 发布时间：2020/9/16 8:59:53
维生素 E（Vitamin E，VE）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
维生素 E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中主要的抗
氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整
性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业
具有较的应用价值。
测定原理
VE 还原 Fe3+为 Fe2+，Fe2+与 1,10-菲罗啉产生有色络合物，在 530nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、漩涡震荡仪。
试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
样本处理
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.2g，加入 1mL
提取液）加入提取液，充分匀浆后用提取液定至 2mL，在漩涡混匀仪上震荡 5min，于
25℃，5000g 离心 10min，取上层测定。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 1000
万细胞加入 2mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，
总时间 3min）；在漩涡混匀仪上震荡 5min，于 25℃，5000g 离心 10min，取上层测定。
3. 血清：取 0.2mL，加 1.9mL 提取液，漩涡仪混匀上震荡 5min，于 25℃，5000g 离心 10min，
取上层测定。
测定操作
对照管 测定管
样品（μL） 500 500
试剂一（μL） 100 100
试剂二（μL） 100
试剂三（μL） 100
充分混匀，25℃反应 5min
试剂四（μL） 300 300
充分混匀，于 1mL 玻璃比色皿，无水乙醇调零，测定 530nm 处吸光值，记为 A
对照管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管。
计算公式
标准曲线：y = 0.022x + 0.0065， R
2
= 0.9978
1. 按照蛋白含量计算
VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷0.022×V 反总÷（V 样×Cpr）
= 181.8×（△A -0.0065）÷Cpr
2. 按照样本质量计算
VE 含量（μg/g）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）
= 181.8×（△A -0.0065）÷W
3. 按照细胞数量计算
VE 含量（μg/104
cell）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）
= 181.8×（△A -0.0065）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VE 含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.022×V 反总÷V 样×20
= 1818×（△A -0.0065）
V 反总：反应总体积，1mL；：V 样：加入样本体积，0.5mL；V 样总：加入提取液体积，2mL；
Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
注意事项
1. 若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 低检出限为 29.5μ g/g。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
