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技术文章
单宁含量试剂盒说明书 微量法 100 管/96 样
点击次数：2718 发布时间：2020/9/16 8:56:34
单宁含量试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，又称植物多酚。具有独特的化学性质和多
种生理活性，如能与蛋白质、生物碱、多糖结合；能与多种金属离子发生络合或静电作用；
具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。
测定原理：
单宁在碱性环境下与磷钼酸反应，生成蓝色化合物，在 760nm 处有大吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体 4mL× 1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 3mL × 1 瓶，4℃保存；
单宁的提取：
按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
蒸馏水），充分匀浆后转移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min， 8000 g，25℃离心 10 min，
取上清液待测。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 760nm 处，蒸馏水调零；试剂一和试
剂二 37℃预热 10min 以上；
2、操作表：
试剂名称（µL） 对照管 测定管
样本 5
蒸馏水 135 130
试剂一 35 35
混匀，室温静置 5min
试剂二 30 30
混匀，室温静置 30min，760nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照，对照管只要做一管。
单宁含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0132x - 0.0035；x 为标准品浓度(µg/mL)，y 为吸光
值。
2、按样本鲜重计算：
单宁含量（µg /g 鲜重）= [(ΔA＋0.0035) ÷0.0132×V1]÷（W×V1÷V2）=75.76×(ΔA＋0.0035)
÷W。
3、按样本蛋白浓度计算：
单宁含量(µg/mg prot)= [(ΔA＋0.0035) ÷0.0132×V1]÷(V1×Cpr)=75.76×(ΔA＋0.0035) ÷Cpr。
V1：加入样本体积，0.005mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本鲜重，g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0066x - 0.0035；x 为标准品浓度（µg/mL），y 为吸光
值。
2、按样本鲜重计算：
单宁含量(µg/g 鲜重)=[(ΔA＋0.0035)÷0.0066×V1]÷(W×V1÷V2)=151.52×(ΔA＋0.0035)
÷W。
3、按样本蛋白浓度计算：
单宁含量(µg/mg prot)= [(ΔA＋0.0035)÷0.0066×V1]÷(V1×Cpr)=151.52×(ΔA＋0.0035)÷Cpr。
V1：加入样本体积，0.005mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本鲜重，g。
注意：低检测限为 10μg /g 鲜重 或 0. 1μg /mg prot
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
