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技术文章
总抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）试剂盒说明书 微量法100T/96S
点击次数：2726 发布时间：2020/9/16 8:36:44
（1）按样本质量计算
总抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=53.9×（△A-0.1291）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反总÷(V 样×Cpr)
=53.9×（△A-0.1291）÷Cpr
（3） 按细胞计算
总抗氧化能力（U/104
cell）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）
= 53.9×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
总抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.6308××V 反总÷V 样= 53.9×（△A-0.1291）
V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，204μL；V 样：反应中样品体积，
6μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.3154x+0.1291；R
2
=0.9989
（1）按样本质量计算
总抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=107.8×（△A-0.1291）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷(V 样×Cpr)
=107.8×（△A-0.1291）÷Cpr
(3) 按细胞计算
总抗氧化能力（U/104
cell）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）
= 107.8×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
总抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷V 样= 107.8×（△A-0.1291）
V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，204μL；V 样：反应中样品体积，
6μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
注意事项：
1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并
戴乳胶手套操作。
2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生
干扰。
3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反
应的还原剂。
4. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测
定。
5. 试剂盒 2-8℃保存。（1）按样本质量计算
总抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=53.9×（△A-0.1291）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反总÷(V 样×Cpr)
=53.9×（△A-0.1291）÷Cpr
（3） 按细胞计算
总抗氧化能力（U/104
cell）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）
= 53.9×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
总抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.6308××V 反总÷V 样= 53.9×（△A-0.1291）
V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，204μL；V 样：反应中样品体积，
6μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.3154x+0.1291；R
2
=0.9989
（1）按样本质量计算
总抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=107.8×（△A-0.1291）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷(V 样×Cpr)
=107.8×（△A-0.1291）÷Cpr
(3) 按细胞计算
总抗氧化能力（U/104
cell）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）
= 107.8×（△A-0.1291）÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
总抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反总÷V 样= 107.8×（△A-0.1291）
V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，204μL；V 样：反应中样品体积，
6μL；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
注意事项：
1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并
戴乳胶手套操作。
2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生
干扰。
3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反
应的还原剂。
4. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测
定。
5. 试剂盒 2-8℃保存。oxidant capacity，T-AOC）试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
研究意义：
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中
常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液
及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理：
在酸性环境下，还原 Fe3+
-三吡啶三吖嗪(Fe3+
-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+
-TPTZ 的能力反映了总
抗氧化能力。
自备实验用品：
恒温水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，使用前预冷。
试剂一：液体 15mL×1 瓶，避光保存。
试剂二：液体 1.5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 1.5mL×1 瓶，避光保存。
混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前 37℃预温。
样品的制备：
(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品
血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心
10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过
30 d）后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入
1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃
离心 10min，取上清，置冰上待测。
操作步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 593nm，蒸馏水调零。
2、操作表
空白管 测定管
混合液（μL） 180 180
样品（μL） 6
双蒸水（μL） 24 18
充分混匀，反应 10min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 593nm 吸光值，△A= A 测定-A 空白
注意：空白管只需测定一次。
总抗氧化能力计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.6308x+0.1291，R
2
=0.9989
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
