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技术文章
土壤锰过氧化物酶试剂盒说明书 可见分光光度法
点击次数：2688 发布时间：2020/9/14 8:56:19
货号: QS2916 规格：50管/24样
土壤锰过氧化物酶
（Soil manganese peroxidase，S-Mnp）试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
锰过氧化物酶（EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。
测定原理
锰过氧化物酶在 Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、震荡仪、甲苯。
试剂组成和配制
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
测定操作
|
| 对照管 | 测定管 |
| 土样（g） | 0.1 | 0.1 |
| 甲苯（μL） | 50 | 50 |
| 25℃，静置 15min | ||
| 试剂一（μL） | 700 | 600 |
| 试剂二（μL） |
| 100 |
| 试剂三（μL） | 200 | 200 |
| 试剂四（μL） | 100 | 100 |
| 充分混匀，于 37℃震荡反应 10min，于 10000rpm，4℃离心 10min，取上清于 1mL 玻璃比色皿，测定 465nm 处吸光值，记为 A 对照管和A 测定管，△A=A 测定管- A 对照管 | ||
酶活计算公式
酶活性定义：每克土壤每分钟氧化 1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
S-MnP 活性（nmol/min/g）=△A÷ε÷d×V 反总÷W÷T= 8.3×△A÷W
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL；W：样本质量，g；T：反应时间，10min
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
