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技术文章
土壤α糖苷酶说明书微量法说明书-价格-赫澎生物
点击次数：2669 发布时间：2020/9/14 8:46:01
土壤α-葡萄糖苷酶（Solid-α-Glucosidase，S-α-GC）试剂盒说明书 微量法 100 管/48 样 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： S-α-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖，是纤维素分解酶 系中重要组成成分之一，在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。 测定原理： S-α-GC 能够催化对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有特征光 吸收。 自备用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：甲苯 5mL×1 瓶，4℃保存；（自备） 试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 13mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的 试剂仍-20℃保存； 试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存； 测定步骤： 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。
2、加样表 试剂名称 测定管 对照管 风干土样（g） 0.02 0.02 试剂一（μL） 10 10 振荡混匀，使土样全部湿润，室温放置 15min 试剂二（μL） 130 试剂三（μL） 160 160 混匀， 37℃水浴 1h 后，95℃水浴 5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却 试剂二（μL） 130 充分混匀，10000g 25℃离心 10min，取上清液（在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂） 上清液（μL） 70 70 试剂四（μL） 130 130 充分混匀，室温静置 2min 后， 400nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每 个测定管设一个对照管。 S-α-GC 活力计算： a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027；x 为标准品浓度（μmol/L），y 为吸光值。 单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-α-GC 活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027) T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：3×10-4 L；W：样本质量，0.02g。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.0027；x 为标准品浓度（μmol/L），y 为吸光值。 单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-α-GC 活力（μmol/d /g 土样）＝ (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V 反总÷W÷T =225×(ΔA+0.0027) T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：3×10-4 L；W：样本质量，0.02g。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
