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技术文章
土壤碱性蛋白酶测试盒说明书-价格-赫澎生物
点击次数：2693 发布时间：2020/9/11 9:37:40
规格：50管/24样
土壤碱性蛋白酶（Solid-Alcalase Protease，S-ALPT）试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是等植物的氮源之一。S-ALPT 在碱性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：
碱性条件下，S-ALPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。
实验中所需仪器及设备：
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水
试剂组成和配置：
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10ml蒸馏水充分溶解待用；剩余试剂4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入100uL试剂七使粉剂润湿，然后加入20ml试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂四： 粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入50ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃
保存；
试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂六：液体 1.5mL×1 支，0.05mg/ml标准酪氨酸溶液；
试剂七：液体 1.5mL×1 支，4℃保存；
测定操作：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四40℃水浴10min。
3、样本测定：
试剂名称测定管对照管
风干土样（g）0.020.02
试剂一（μL）100300
试剂三（μL）200
混匀后，40℃水浴 30min，振荡 5-6 次，使土样与反应液充分接触
试剂二（μL）100100
混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液
测定管对照管标准管
上清液（μL）150150
试剂六（μL）150
试剂四（μL）700700700
试剂五（μL）150150150
混匀，40℃水浴 20min，680nm下读取各管吸光值A
注意 ：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ALPT 活性计算：
单位定义：每天每 g 土样中产生1mg酪氨酸为一个S-ALPT活力单位。
S-ALPT(mg/d/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=48×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管
C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.4mL；T：反应时间，30min=1/48d； W：样本质量，0.02g。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
