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技术文章
酵母细胞壁分离试剂盒产品说明书-赫澎生物
点击次数：2698 发布时间：2020/9/9 9:50:52
酵母细胞壁在细胞生长和分裂时，决定着细胞的形态和完整性。酵母细胞壁是一种动力结构，由多糖和蛋白，例如葡聚糖（glucan）、甘露聚糖（mannan）、 甲壳素（chitin）等构成的超分子网络，适应酵母生理和形态变化，包括单倍体细胞接合（conjugation）、孢子形成（sporulation）或假菌丝形态（pseudohyphal growth）等。酵母细胞壁的分离通常采用化学法和生物酶解法，从而获得完整或特异的胞壁成分。
产品内容
hepengbio清理液（Reagent A）毫升
hepengbio平衡液（Reagent B）毫升
hepengbio酸珠液（Reagent C）毫升
GENEMD 净化液（Reagent D）毫升
hepengbio保存液（Reagent E）毫升
产品说明书1 份
保存方式
保存在 4℃冰箱里, 有效 证 6 月
用户自备
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5 毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
分光光度仪：用于测定酵母细胞浓度
涡旋震荡仪：用于裂解酵母细胞壁
实验步骤
1． 准备好 50 毫升新鲜酵母样品（注意：通过选择性培养液培养获得酵母细胞）
2． 在分光光度仪上测定OD600（注意：建议达到 1 OD，即 1 X 107细胞/毫升；总量为 5 X 108细胞）
1
3． 转移到预冷的 50 毫升锥形离心管
4． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入 xx 毫升 hepengbio清理液（Reagent A），混匀
7． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
8． 小心抽去上清液
9． 重复实验步骤 6 至 8 一次
10．加入 xx 毫升 hepengbio平衡液（Reagent B），混匀
11．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g
12．小心抽去上清液
13．加入 xx 微升 hepengbio平衡液（Reagent B）
14．加入 xx 微升 hepengbio酸珠液（Reagent C）
15．在 4℃环境下，持续强力涡旋震荡 2 分钟，间歇 1 分钟
16．重复实验步骤 15 五次
17．放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g
18．小心移取上清液（500 微升）到新的 15 毫升锥形离心管（收集管）
19．加入 xx 微升 hepengbio平衡液（Reagent B）到上述含有 hepengbio酸珠液（Reagent C）的锥形离心
管
20．涡旋震荡 15
21．放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g
22．小心移取上清液（500 微升）合并到上述收集管
23．重复实验步骤 19 至 22 二次
24．将收集管（总量为 2 毫升上清液）放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 3800g
25．小心抽掉上清液，保留沉淀颗粒――此为细胞壁成分
26．加入 xx 微升 hepengbio净化液（Reagent D），混匀
27．转移到 1.5 毫升离心管
28．放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 5000g
29．小心抽掉上清液
30．重复实验步骤 26 至 29 三次
31．加入 xx 微升 hepengbio清理液（Reagent A），混匀
32．放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 5000g
33．小心抽掉上清液
34．加入 xx 至 xx 微升 hepengbio保存液（Reagent E）
35．放进－70℃的冰箱里备用
36．或放入冰槽里，继续各种后续操作
注意事项
1． 本产品为 20 次操作
2． 所有操作均须在 4℃状态下进行
3． 细胞生长切莫过度，否则影响蛋白表达和细胞裂解
4． hepengbio酸珠液（Reagent C）为固体状，移取方法为：使用 1 毫升枪头，将尖端部分剪去；或使用
0.5 毫升 PCR 管的盖子内圈盛满；或秤重 0.1 克
5． 50 毫升（0D600＝1）菌液湿重约 1 克
2
6． 50 毫升（0D600＝1）菌液可获得约 250 毫克湿重的胞壁成分，其中 94％为多糖，5％为蛋白
7． 制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，避免反复冻融
8． 本公司提供系列酵母细胞制备试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定无蛋白酶污染
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
