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植物酸性磷酸酶总活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
点击次数： 85发布时间：2021/5/21 12:22:53
- 上 传 者： 上海极威生物科技有限公司
- 上传时间： 2021/5/21 12:22:53
- 文件大小： 69KB
- 文件类型： jpg
- 所属分类： 应用方法
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资料简介： 植物酸性磷酸酶总活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 植物酸性磷酸酶总活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过酸性磷酸酶反应系统中对硝基酚磷酸水解后产物峰值的变化，即采用比色法来测定植物组织裂解悬液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种植物组织，包括种子、球茎（bulb）、块茎（tuber）、根（root）、种叶（coleoptile）和叶片裂解悬液样品或纯化以及粗提的酶蛋白酸性磷酸酶的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。 技术背景 酸性磷酸酶（acid phosphatase；ACP；EC 3.1.3.2），是一种酸性水解酶（acid hydrolase）和去磷酸化酶，即磷酸单酯酶（phosphomonoesterase），在酸性环境下，水解磷酸单酯化合物而释放出无机磷。酸性磷酸酶活性与细胞生长、能量代谢、代谢调节、信号通道等功能有关。在动物体内和植物中普遍存在。植物酸性磷酸酶是植物和土壤中普遍存在的水解酶，其活性高低与植物和土壤中的磷素水平密切相关。间接影响植物光合成、呼吸和生长等。植物酸性磷酸酶在种子、球茎（bulb）、块茎（tuber）、根（root）、种叶（coleoptile）和叶片组织中高度表达。基于对硝基酚磷酸（p-nitrophenyl phosphate）在酸性磷酸酶的催化下，产生磷酸（phosphate）和生色产物对硝基苯酚（p-nitrophenol），在分光光度仪下，其吸光值的变化（410nm 波长），来定量测定酸性磷酸酶的总活性。酸性磷酸酶反应系统为： 产品内容 清理液（Reagent A） 毫升 裂解液（Reagent B） 毫升 缓冲液（Reagent C） 毫升 底物液（Reagent D） 毫升 终止液（Reagent E） 毫升 阴性液（Reagent F） 微升 产品说明书 1 份 保存方式 保存底物液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；底物液（Reagent D）避免光照；终止液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证 6 月 用户自备 15 毫升锥形离心管：用于样品制备的容器 1.5 毫升离心管：用于样品保存的容器 DOUNCE 匀浆器：用于裂解组织样品2 恒温培养箱：用于反应物孵育的容器 （微型）台式离心机：用于样品制备 比色皿或酶标板：用于比色的容器 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析 实验步骤 一、 样品准备 1．准备好新鲜的植物组织，并秤重以确定组织重量 200 毫克 1．（选择步骤）放进预冷的 15 毫升锥形离心管 2．（选择步骤）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次 3．移入到一个液氮冻存管 4．即刻放进液氮罐过夜 5．次日从液氮罐里取出，即刻（快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融） 6．放进一个 15 毫升锥形离心管 7．加入预冷的 xx 微升裂解液（Reagent B） 8．涡旋震荡 5 ，充分混匀 9．即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器 10．在冰槽里用研磨棒匀化组织（约 80 下） 11．将所有组织匀浆物移入 1.5 毫升离心管 12．放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415） 13．小心移取 500 微升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管 14．移取 10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1） 15．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作 二、 测定准备 1．准备好上述待测样品，置于冰槽里 2．设定好分光光度仪（温度为 37℃）：波长 410nm，并置零 3．缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度 三、 背景对照测定 1．移取 xx 微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿 2．加入 xx 微升底物液（Reagent D） 3．加入 xx 微升阴性液（Reagent F） 4．上下倾倒数次，混匀 5．放进 37℃恒温培养箱孵育 30 分钟，避免光照 6．加入 xx 微升终止液（Reagent E），混匀 7．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照读数 四、 样品活性测定 1．移取 xx 微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿3 2．加入 xx 微升底物液（Reagent D） 3．加入 20 微升待测样品（总量 50 微克蛋白） 4．上下倾倒数次，混匀 5．放进 37℃恒温培养箱孵育 30 分钟，避免光照 6．加入 xx 微升终止液（Reagent E），混匀 7．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数 五、 计算样品活性 六、酶标板测定 1．在 96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照和待测样品 2．分别移取 xx 微升缓冲液（Reagent C）到所有孔中 3．分别加入 xx 微升底物液（Reagent D） 4．分别加入 xx 微升阴性液（Reagent F）或待测样品（20 微克蛋白）到相应孔中 5．轻轻摇动酶标板 6．放进 37℃恒温培养箱孵育 30 分钟，避免光照 7．加入 xx 微升终止液（Reagent E） 8．轻轻摇动酶标板 9．即刻放进酶标仪检测 10．活性计算 注意事项 1．本产品为 20 次（比色皿）和 80 次（酶标板）操作，包括背景对照 2．操作时，须戴手套 3．终止液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全 4．系统操作过程中，背景测定只需 1 次 5．样品须澄清，至关重要 6．避免使用氟化物（fluoride）、酒石酸（tartrate）、草酸盐（oxalate）、氯苯丁酯（clofibrate）等处理样品 7．比色测定后，比色皿须清洗彻底 8．样本测定读数升高表明具有酶活性 9．建议待测样本蛋白浓度为50微克/20微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒GMS30030.1） 10．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度 11．酸性磷酸酶单位活性定义为：在 37℃，pH 5.0 条件下，每分钟内能够释放 1 微摩尔对硝基苯酚所需的酶量作为一个活性单位 12．本公司提供系列酸性磷酸酶类检测试剂产品 质量标准 1．本产品经鉴定性能稳定 2．本产品经鉴定检测敏感 使用承诺 秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。 友情提醒 IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。 订购信息 单组分订购信息 编号 名称 规格 GMS50049.4 植物酸性磷酸酶总活性比色法定量检测试剂盒 20/80 次 GMS50049.4A 清理液（Reagent A） 毫升 GMS50049.4B 裂解液（Reagent B） 毫升 GMS50049.4C 缓冲液（Reagent C） 毫升 GMS50049.4D 底物液（Reagent D） 毫升 GMS50049.4E 终止液（Reagent E） 毫升 GMS50049.4F 阴性液（Reagent F） 毫升
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