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微量丙二醛(MDA)测试盒/TBA法
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详细内容
货号:XYP9093013
微量丙二醛(MDA)测试盒说明书
本试剂盒是在原 MDA 试剂盒针对一些含量较少的样本(比如培养细胞及细胞上清)测试效果不是太好的
的基础上改进的一种更为灵敏、简便的测试方法。
一、测定意义:
机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基,后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty
acid,PUFA),引发脂质过氧化作用,并因此形成脂质过氧化物。如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羟基、
羰基、氢过氧基或内过氧基,以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂,即
非自由基性的脂类分解产物,而且通过链式或链式支链反应,放大活性氧的作用。
因此,初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成,这些分解产物中,一些是无害的,另一些则能
引起细胞代谢及功能障碍,甚至死亡。
氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸(PUFA)的过氧化引起细胞损伤,而且还能通过脂氢过氧化物
的分解产物引起细胞损伤。因而测试 MDA 的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度,间接地反映出细胞
损伤的程度。
MDA 的测定常常与 SOD 的测定相互配合,SOD 活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力,而 MDA
的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度,通过 SOD 与 MDA 的结果分析有助于医学、生
物学、药理及工农业生产的发展。
二、测试原理:
过氧化脂质降解产物中的丙二醛 (MDA)可与硫代巴比妥酸(TBA)缩合,形成红色产物,在 532nm 处有
最大吸收峰。因底物为硫代巴比妥酸(Thibabituric Acid TBA)所以此法称 TBA 法。
三、测试所需仪器设备:
可见光分光光度计,可调到 95℃左右的恒温水浴箱或沸水浴锅,离心机
四、试剂盒组成与配制:
试剂一:液体 10ml×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 6ml×1 瓶,用时加 170ml 双蒸水混匀,4℃冷藏。(注意不要碰到皮肤上)。
试剂三:粉剂×1 支,用时将粉剂加入到 90℃~100℃的热双蒸水 30ml 中,(在溶解过程中可适当加热),充分溶解后用双蒸水补足至 30ml 再加冰醋酸 30ml,混匀,配好的试剂避光室温保存。
(注:冰醋酸自备)
标准品:10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml×1 瓶,4℃冷藏。
[注]:冰醋酸(分析纯,乙酸浓度≥99.5%);测试盒冷藏至少可保存一年。
五、试剂盒组成与配制:
试剂一:液体 20ml×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 12ml×1 瓶,用时每瓶加 340ml 双蒸水混匀,4℃冷藏(注意不要碰到皮肤上)。
试剂三:粉剂×1 支,用时将粉剂加入到 90℃~100℃的热双蒸水 60ml 中,(在溶解过程中可适当加热),充分溶解后用双蒸水补足至 60ml 再加冰醋酸 60ml,混匀,配好的试剂避光室温保存。
(注:冰醋酸自备)
标准品:10nmol/ml 四乙氧基丙烷 5ml×1 瓶,4℃冷藏。
[注]:冰醋酸(分析纯,乙酸浓度≥99.5%);测试盒冷藏至少可保存一年。
六、规范操作方法:
1、操作表:

旋涡混匀器混匀,试管口用保鲜薄膜扎紧,用针头刺一小孔,95℃水浴(或用锅开盖煮沸)40 分钟,取出
后流水冷却, 532nm 处,1cm 光径,双蒸水调零,测各管吸光度值。
a*表示所取的样品量、标准品量、无水乙醇的量、试剂一的量,四者均相等。例如样品取 0.1ml 则标准品、
无水乙醇、试剂一也取 0.1ml,若样品取 0.2ml 则标准品、无水乙醇及试剂一也取 0.2ml。因吸光度与加
样量呈正比曲线,因而结果不受影响。
**对照管每个样本都需要做。
2、参考取样量:血清(浆)取 0.1~0.2ml。低密度脂蛋白悬液取 0.1~0.2ml 。细胞悬液及细胞上清取 0.1~0.2ml。
3、规范操作方法标准管参考吸光度:当标准品取样量为 0.1ml 时,则标准管吸光度减去空白管的吸光度
为 0.065~0.070。当标准品取样量为 0.2ml 时,则标准管吸光度减去空白管的吸光度为 0.130~0.140。
4、规范操作方法及简便操作方法中,若发现检测样本吸光度太低,可以将水浴时间 40 分钟延长至 80 分
钟,但您的同一课题中 MDA 的检测都必须延长至 80 分钟,以免造成批间差异。
七、简便操作方法:
1、混合试剂的配制:
工作液Ⅰ的配制:试剂一:试剂二:试剂三= a*:3:1,用多少配多少,配好后当天测定
工作液Ⅱ的配制:试剂一:试剂二: 50%冰醋酸= a*:3:1,用多少配多少,配好后当天测定
注:a*表示与样本的取样量相同,单位为毫升(ml)
2、简便操作表:
旋涡混匀器混匀,试管口用保鲜薄膜扎紧,用针头刺一小孔,95℃水浴(或用锅开盖煮沸)
40 分钟,取出后流水冷却, 532nm 处,1cm 光径,双蒸水调零,测各管吸光度值。
a*表示所取的样品量、标准品量、无水乙醇的量、试剂一的量,四者均相等。例如样品取 0.1ml 则标准品、
无水乙醇、试剂一也取 0.1ml,若样品取 0.2ml 则标准品、无水乙醇及试剂一也取 0.2ml。因吸光度与加
样量呈正比曲线,因而结果不受影响。
**对照管每个样本都需要做。
注 1:以上规范操作法及简便操作法适用于人及各种动植物的样本(包括血清、动植物组织及体液、细胞及细胞培养液等)。
注 2:规范操作方法及简便操作方法中,若发现检测样本吸光度太低,可以将水浴时间 40 分钟延长至 80分
钟,但您的同一课题中 MDA 的检测都必须延长至 80 分钟,以免造成批间差异。
八、注意点:
1、试管要刷洗干净,尤其测微量样品时更为重要。
2、配制试剂时要充分混匀。测试过程中管吸的试剂要丢弃,加样品或试剂时要垂直加,不要加在管壁上。95℃水浴前要充分混匀。
3、水浴时间及温度要固定。没有水浴锅的单位可用铝锅、铝盒、铝盆等开盖煮沸即可。
4、高脂样本操作时,离心沉淀一定要充分,否则影响吸光度,造成结果不稳定。这种情况
可增加离心转速(3000 转/分以上)或者延长离心时间使沉淀完全。5、冬天若发现测试溶液呈雾状可以轻轻放水浴箱稍稍加温,待溶液溶解呈透明状态用移液器吸取放入比色杯中,若仍然呈雾状,则考虑为高脂血症。
6、样本取样量:若您的样量较多,取样量可以加倍,抽提过程中,双蒸水、无水乙醇、均要加倍。若您的样本为贫血病人的血样,则取样量也要加倍,抽提过程中,双蒸水、无水乙醇、的量则不变。
7、95℃水浴时用带盖的试管,以免反应液的蒸发。若没有带盖的试管可用冰箱保鲜膜盖好,用橡皮筋
扎好后在保鲜膜上用针刺一小孔即可代替盖子。
九、本试剂盒优点:
1、本试剂盒中试剂均无刺激性气味,对操作人员无任何毒害。
2、快速准确,操作简便,每小时可测 100 例以上样本。
3、灵敏度高,血清或血浆样品只需 0.1ml,或者更少。
4、再现性好,变异系数 CV=2.0%,同一份标本数次测试结果相差极微。
5、呈色稳定,呈色后半天内测吸光度不变。
6、试剂稳定,保质期一年;试剂三配制后避光室温保存至少 3 个月(颜色变成咖啡色即不可使用)
7、血清样品放置 4℃,3~5 天内测试结果不变。⁻⁷0℃以下可保存 3 个月至半年。
8、测试面广,可测血清(浆)、各种组织匀浆,培养细胞等。
9、主要原料均为进口,但价格适中。
10、不需昂贵与特殊仪器,只需恒温水浴箱或者铝锅、铝盆开盖煮沸,及 721、722、751、752 分光光度计任一型号均可。
11、不受气温等外界因素的影响。是目前国内最稳定的 MDA 测试方法。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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