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细胞色素b5含量测试盒/微量法
价格：￥ 332
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:43
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详细内容
货号：XYC9009
细胞色素b5含量测试盒说明书
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白，其比值的变化与P450代谢活性密切相关。
测定原理:
氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后，在424nm处有最大吸收峰，通过测定424nm和490nm 处吸光值的差异，即可计算出细胞色素b5的含量。
自备仪器和用品:
普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×2瓶，4℃保存。临用前各加100mL蒸馏水，充分溶解。试剂二:液体×1瓶，4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶，4℃保存。
工作液配制:临用前配制，戴一次性手套，小心打开试剂三瓶盖，加试剂二20mL充分溶解，4℃避光可保存1周。
样品中细胞色素b5提取:
1、除去细胞核。线粒体等大分子物质:称约0.5g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液，转入超速离心管中。
2、粗制徼粒体:100 000g，4℃离心60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加 1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。
4、待测液:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，即待测液，该待测液需当天测定。
细胞色素b5含量测定操作:
1.分光光度计/酶标仪预热30 min。
2.工作液置于25℃水浴中预热30 min。
3.空白管:取 1mL玻璃比色皿，加入10 uL蒸馏水，200uL 工作液，室温静置2 min，424nm和 490nm 处吸光值，424nm 处吸光值记为A空白管1，490nm 处吸光值记为A空白管2。AA空白管=A空白管1-A空白管2
4．测定管:取 1mL玻璃比色皿，加入10 uL待测液，200uL工作液，室温静置2min，424nm和490nm处吸光值，424nm处吸光值记为A测定管1，490nm 处吸光值记为A测定管2。A测定管=A测定管1-A测定管2。
注意:只需要做一个空白管。
样品细胞色素b5含量计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
细胞色素b5含量(nmol/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)+(Exd)xV反总÷(Cpr×V样)
=0.1228×(八A测定管-AA空白管):Cpr
(2）按样本质量计算
细胞色素b5含量(nmol/g鲜重)=(△A测定管-△A空白管)-(Exd)×V反总×(V样总÷V样)÷w
=0.0614×(AA测定管-AA空白管)-w
ε:还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数，171×10-3 L/nmolcm; d:比色皿光径(cm)，1cm;V反总:反应体系总体积，210 uL=2.1×10-4L;Cpr:待测液蛋白质浓度(mg/mL)，需要另外测定;V样:加入反应体系中待测液体积，10 uL=0.01 mL;V样总:待测液总体积,0.5 mL;W:样品质量（g)。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
(1）按蛋白浓度计算
细胞色素b5含量(nmol/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)-(e×d)×V反总÷(CprxV样)
=0.2456×(AA测定管-△A空白管):+Cpr
(2）按样本质量计算
细胞色素b5含量(nmolg鲜重)=(△A测定管-△A空白管)-(Exd)×xV反总×(V样总÷V样)-w
=0.1228×(AA测定管-AA空白管)--w
ε:还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数，171×10-3 L/nmol/cm; d: 96孔板光径(cm),0.5cm;V反总:反应体系总体积，210 uL =2.1×10-4L;Cpr:待测液蛋白质浓度(mg/mL)，需要另外测定;V样:加入反应体系中待测液体积，10 uL=0.01 mL; V样总:待测液总体积，0.5 mL; W:样品质量（g)。
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热门标签：细胞色素b5,细胞色素b5含量测试盒,微量法
