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线粒体呼吸链复合物IV测试盒
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详细内容
货号:XYP9093022
线粒体呼吸链复合物IV测试盒说明书
一、反应原理:
线粒体呼吸链复合物 IV (Mitochondria Complex IV),又称为细胞色素 C 氧化还原酶(cytochrome c
oxidoreductase)或细胞色素 C 氧化酶(Cytochrome c oxidase),存在于真核生物的细胞线粒体上,主要通
过氧化磷酸化为细胞提供能量。呼吸链复合物 IV 是由 13 种不同的亚体构成的复合物,其中含有 2 个血红
素(heme)基团(a 和 a3)和 2 个铜原子,作为辅基(prosthetic groups)。
呼吸链复合物 IV 的遗传变异导致氧化磷酸化类疾病,包括阿茨罕默综合症和肿瘤等。基于底物还原型细胞
色素 C(reduced cytochrome c),受到呼吸链复合物 IV 的催化,转化为氧化型细胞色素 C(oxidized
cytochrome c),在分光光度仪下,出现吸光值的变化(550nm 波长),由此定量测定呼吸链复合物 IV 的活
性。呼吸链复合物 IV 反应系统为:
二、试剂组成:

三、保存方式
缓冲液(Reagent A)和稀释液(Reagent C)保存在 4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里;反应液(Reagent B)避免光照;有效保证 6 月
四、用户自备
比色皿:用于比色分析的容双波长分光光度仪:用于比色分析培养箱:用于孵育反应物 1.5 毫升离心管:用于反应液配制的容器培养箱:用于孵育反应物1.5 毫升离心管:用于反应液配制的容器
五、实验步骤
(一)、背景对照测定
1、移取 800 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升稀释液(Reagent C)
3、上下倾倒数次,混匀
4、室温静置 3 分钟
5、加入 100 微升含有反应液(Reagent B)和稳定液(Reagent D)的工作液
6、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
7、即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:(0 秒读数-60 秒读数),正常读数差值为 0.001 至 0.005
(二)、样品活性测定
1、移取 800 微升缓冲液(Reagent A)到新的比色皿
2、加入 100 微升待测样品(注意:建议总量 2 微克线粒体蛋白)
3、上下倾倒数次,混匀
4、室温静置 3 分钟
5、加入 100 微升含有反应液(Reagent B)和稳定液(Reagent D)的工作液
6、上下倾倒数次,混匀(限定在 3 秒之内)
7、即刻放进分光光度仪检测,此为背景空对照:(0 秒读数-60 秒读数),正常读数差值为正值
六、样品活性计算
(样本读数 - 背景读数)×体系容量(1ml)×样本稀释倍数 ÷样本蛋白浓度样本容量(0.1ml)×21.84(毫摩尔吸光系数)×反应时间(1 或者 5 分钟) (mgprot/ml)单位:µmol 细胞色素 C /min/mgprot
(蛋白浓度可通过总蛋白定量考马斯亮蓝法试剂盒测定)
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:线粒体呼吸链,线粒体呼吸链复合物IV测试盒,线粒体呼吸链复合物IV
















