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溶菌酶(LZM)测试盒/比浊法
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货号:XYP9092991
溶菌酶(LZM)测试盒说明书
本所比浊法测定溶菌酶活性主要有三种:
1、自身对照法:适用于样本数量较少,或者样本有混浊或有颜色(如血液红色);
2、空白对照法:适用于样本量多且样本比较澄清;
3、标准曲线法。
一、测定原理:
在一定浓度的混浊菌液中,由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低,透光度增强,故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。
二、试剂组成及配制
1、试剂组成:
试剂一:菌粉,5mg×4 支,2~8℃干燥保存,有效期 6 个月。
试剂二:菌粉溶剂,100ml×1 瓶,2~8℃保存,并每月放微波炉中温消毒 20 秒,有效期 6 个月。
试剂三:标准品,粉剂 2mg×1 支(活力为 8 万单位/mg),2~8℃干燥保存,有效期 6 个月。
[注]:试剂盒严格按照上述方法保存有效期可延至一年。
2、试剂配制:
(1)、贮备菌液的配制:
取 5mg/支的菌粉 1 支,倒入匀浆管中,加菌粉溶剂 1ml,轻轻缓慢上下旋转研磨 3 分钟(切勿溅出),即为贮备菌液,将其取出后置 2~8℃冰箱密封保存一周左右。
(2)、应用菌液的配制:
按贮备菌液:菌粉溶剂=1:19 进行配制,需多少配多少。剩下的应用菌液 2~8℃可保存一周左右。是现用现配,用时摇匀。
(3)、标准品的配制:
①、标准品贮备液的配制:
每支准确加双蒸水 1.0ml 配成 2mg/ml 的标准品贮备液。2~8℃可保存 7~10 天。
②、标准品应用液的配制:
临用时按标准品贮备液∶双蒸水=1∶799 比例稀释成 2.5µg/ml(即 200U/ml)的标准品应用液,需多少配多少。2~8℃保存,可保存 7~10 天。
[注]:本法用分光光度计 530nm 处,1cm 光径比色皿测得是样本或标准的透光度值
1、操作步骤
①、将配制好的应用菌液,标准应用液及所需检测的样本均放入 37℃水浴箱中预温 5 分钟以上。使菌液,标准液及检测样本的温度达到 37℃。
②、将可见分光光度计于 530nm 处,1cm 光径比色皿,以双蒸水调透光度 100% (比色皿准备两只,一只用于调透光度 100%,一只用于测定)。
③、往相应编号的试管中加入 0.2ml 待测样本,取 2ml 应用菌液迅速冲入试管中,立即混匀并计时。(标准品应用液取 0.2ml,加入 2ml 应用菌液,其它操作与测定相同)
④、迅速倒入比色皿中在可见分光光度计 530nm 处比浊,5 秒时读取透光度值 T0, 比色皿不要取出,在2 分 5 秒时读取透光度值 T2;
[注]:如 5 秒时来不及读数,可 20 秒时读取调透光度值 T0,在 2 分 20 秒时读取透光度值 T2,标准管需同样操作。
⑤、求出 2 次透光度的差值(△T= T2-T0)。
[注]:用同一比色皿每检测一个样本后均要用双蒸水冲洗干净,才可再放第二个样本或标准品应用液。
2、计算公式:

[注]:本法用分光光度计 530nm 处,1cm 光径比色皿测得是样本或标准的透光度值 1、操作表:(操作最
好在冰水浴中进行):
[注]:冰水浴即自来水中加几块冰。
倒入 1cm 光径比色皿中,530nm 处以双蒸水调透光度 100%,比色,测各管透光度 T15(T15即 37℃水浴 15 分钟后的透光度值)。
[注 1]:比色时可能在比色皿表面有水雾形成,请将比色皿擦干净后再比色。
[注 2]:测试过程中为消除每只测定管之相互间的干扰,所以必须在每支管子测定前将比色皿用双蒸水冲
洗干净。
[注 3]:OT15 为水浴 15 分钟后的空白管透光度,UT15 为水浴 15 分钟后测定管的透光度,ST15 为水
浴 15 分钟后标准管的透光度。
2、计算公式:
1、标准曲线的制备:
①、标准液的配制:
将标准品 2mg 准确加双蒸水 1.0 ml,混匀,配成 160000 U/ml 的标准品贮备液,再取适量的标准品贮备液,用双蒸水分别稀释成 2000 U/ml、1000 U/ml、500 U/ml、250 U/ml、125 U/ml、62.5 U/ml、31.25 U/ml、15.625 U/ml 的不同浓度的标准液。
②、将应用菌液及各种浓度的溶菌酶标准液置于 0℃的冰水中预冷 5 分钟以上。
③、按下表进行操作:(操作在冰水浴中进行)

37℃准确水浴 15 分钟,立即取出置于 0℃以下的冰水浴中 3 分钟,逐管取出,倒入 1cm光径比色皿中,530nm 处,双蒸水调透光度 100%,比色,测各管透光度 T15(T15 即 37℃水浴15 分钟后的透光度值)。
④、作坐标图:
以各标准管的单位浓度为横坐标,以各管透光度差值为纵坐标作图。2、按方法二进行测定然后查标准曲线(但不如计算公式方便)
[注]:因试剂盒内带有标准品,每次只需做 1~2 只标准管即可以,一般不需要作标准曲线。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:溶菌酶(LZM),溶菌酶(LZM)测试盒,比浊法
















