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细胞色素b5含量测试盒/分光光度法
价格：￥ 45
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:43
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详细内容
货号：XYC9010
细胞色素b5含量测试盒说明书
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白，其比值的变化与P450代谢活性密切相关。
测定原理:
氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后，在424nm处有最大吸收峰，通过测定424nm和490nm处吸光值的差异，即可计算出细胞色素b5的含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加100mL蒸馏水，充分溶解。试剂二:液体×1瓶，4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶，4℃保存;
工作液配制:临用前配制，戴一次性手套，小心打开试剂三瓶盖，加试剂二50 mL充分溶解，4℃避光可保存1周。
样品中细胞色素b5提取:
1、除去细胞核，线粒体等大分子物质:称约0.5g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液，转入超速离心管中。
2、粗制微粒体: 100 000g，4℃离心60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1mL试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。
4、待测液:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，即待测液，该待测液需当天测定。
细胞色素b5含量测定操作:
1.分光光度计预热 30 min。
2．工作液置于25℃水浴中预热30 min。
3.空白管:取1mL玻璃比色皿，加入50 uL蒸馏水，1000u L工作液，室温静置2 min，424nm和490nm处吸光值，424nm 处吸光值记为A空白管1，490nm处吸光值记为A空白管2。AA空白管=A空白管1-A空白管2
4.测定管:取 1mL玻璃比色皿，加入.50 uL特测液，1000uL工作液，室温静置2 min，424nm和490nm 处吸光值，424nm 处吸光值记为A测定管1，490nm 处吸光值记为A测定管2。AA测定管=A测定管1-A测定管2。
注意:只需要做一个空白管。
样品细胞色素b5含量计算公式:
(1).按照蛋白浓度计算:
细胞色素b5含量(nmol/mg prot)=(△A测定管-△A空白管)-&÷dxV反总÷(Cpr×V样)
=0.123×(AA测定管-△A空白管)+Cpr
(2).按照样本质量计算:
细胞色素b5含量(nmol/g 鲜重)=(△A测定管-△A空白管)=c÷dxV反总x(V样总÷V样)÷w
=0.0614×(AA测定管-AA空白管)--w
ε:还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数，171×10-3L/nmol/cm; d:比色皿光径(cm)，1cm;V反总:反应体系总体积，1.05 m L=0.00105 L;Cpr:待测液蛋白质浓度(mg/mL)，需要另外测定;V样:加入反应体系中待测液体积，50 u L=0.05 mL;V样总:待测液总体积，0.5 mL; W:样品质量，g.
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热门标签：细胞色素b5,细胞色素b5含量测试盒,分光光度法
