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氨基比林-N-去甲基化酶(ＡND)测试盒/分光光度法
价格：￥ 691
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:08:43
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详细内容
货号：XYP9076799
氨基比林-N-去甲基化酶(AND)测试盒说明书
注 意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
细胞色素 P450 酶是一组在外源物质代谢中，尤其是药物和毒物，具有重要作用的酶系。AND作为 P450 酶系的重要一员，相当于 CYP3A4 亚型，与药物的去甲基化反应密切相关。
测定原理：
AND 催化氨基比林释放甲醛，通过 Nash 比色法测定甲醛含量，即可计算出 AND 活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、普通离心机，超速离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水、无水乙醇和冰。
试剂组成和配制：
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 50mL 蒸馏水充分溶解。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶（棕色瓶），4℃避光保存。临用前加入 2.6 mL 无水乙醇，充分溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 2.6 mL 蒸馏水，充分溶解。
试剂五：粉剂×1 瓶，室温保存。临用前加蒸馏水 10mL 充分溶解。
试剂六：液体×1 瓶，室温保存。
试剂七：液体×1 瓶，4℃保存。
标准液：液体×1 瓶，-20℃保存。临用前取 1.5 mL EP 管，加入 10µl 标准液，加 990µl 蒸馏水，混匀即为0.05 mmol/L 标准甲醛溶液，4℃保存。
粗酶液提取：
1、除去细胞核，线粒体等大分子物质：称约 0.5g 组织，加入 1 mL 试剂一，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心 30min，取上清液转入超速离心管。
2、粗制微粒体：4℃，100 000g，离心 60min，弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质：向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g 离心 30min，弃上清液。
4、最终微粒体：向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5 mL，盖紧后充分震荡溶解，即粗酶液，待测。该待测液需当天使用。
AND 活性测定操作：
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。
3. 对照管：取 1 支 EP 管，加入 50µL 粗酶液，850µL 试剂二，50µL 试剂三，50µL 蒸馏水，混匀后置于37℃水浴保温 30min；立即加入 175µL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 175µL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取新的 EP 管，加入 500µL 上清液，500µL 试剂七，混匀后60℃
水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min，于 412nm 测定光吸收，记为 A 对照管。
4. 测定管：取 1 支 EP 管，加入 50µL 粗酶液，850µL 试剂二，50µL 试剂三，50µL 试剂四，混匀后置于37℃水浴保温 30min；立即加入 175µL 试剂五，混匀后置于冰浴中 5min；取出后加入 175µL 试剂六，混匀后室温静置 5min；室温 8000rpm 离心 5min；取 1 支新 EP 管，加入 500µL 上清液，500µL 试剂七，混匀后60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min，于 412nm 测定光吸收，记为 A 测定管。
5. 标准管：取 1 支 EP 管，加入 500µL 标准品，500µL 试剂七，混匀后 60℃水浴 10min，然后取出，用冷水冷却 5min，于 412nm 测定光吸收，记为 A 标准管。
注意：每个样品都需要做对照管。
AND 活性计算：
(1).按照蛋白浓度计算:
活性单位定义：37℃中每分钟每毫克蛋白催化产生 1nmol 甲醛为 1 个酶活单位。
AND 活性(nmol/min/mg prot)= C 标准品×V 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷A 标准管×稀释倍数÷（Cpr×V 样）÷T= 45×（A 测定管－A 空白管）÷A 标准管÷Cpr
(2).按照样本质量计算:
活性单位定义：37℃中每分钟每克样品催化产生 1nmol 甲醛为 1 个酶活单位。
AND 活性(nmol/min/g 鲜重)= C 标准品×V 标准品×（A 测定管－A 对照管）÷A 标准管×稀释倍数÷(W×V样)÷T
= 45×（A 测定管－A 对照管）÷A 标准管÷W
C 标准品：0.05 mmol/L=50µmol/L；V 标准品：500µL=0.0005 L；稀释倍数：V 反总÷V 上清液=（50+850+50+50+175+175）÷500=2.7；Cpr：粗酶液蛋白质浓度 mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；V 样：加入粗酶液体积，50µL=0.05mL；W：样本质量，g ；T：反应时间，30min。
注意事项：
1、粗酶液需在当日完成测定，如需保存，则向粗酶液提取步骤 3 的沉淀中加 0.5ml 20%的甘油，分装后，-80℃保存；
2、试剂三和试剂四需临用前配制，如当天没有用完，4℃避光保存，可用 1 周；
3、粗酶液可直接用于蛋白浓度测定，建议用 BCA 法测蛋白含量。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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