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HEK-293A-GFP-Puro稳转株
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详细内容
HEK-293A-GFP-Puro稳转株
英文名称 | HEK-293A-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1517 |
中文名称 | GFP 标记的 HEK-293A 稳转株 |
Lot number | HEK-293A-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

HEK-293A-GFP-Puro 稳转株概述
HEK-293A-GFP-Puro 稳转株是基于人胚肾细胞系 HEK-293A(Human Embryonic Kidney 293A)构建的稳定转染细胞株,具有以下关键特征:
1. 基础细胞系:HEK-293A
来源:源自人胚肾细胞,经腺病毒 5 型 DNA 转化,是 HEK-293 细胞的衍生株。
特性:
贴壁生长,易于培养和转染,常用于重组蛋白表达、病毒包装(如慢病毒、腺病毒)等。
相比原始 HEK-293 细胞,HEK-293A 的细胞形态更规则,适合高密度培养。
2. 关键修饰:GFP 与 Puromycin 抗性
GFP(绿色荧光蛋白):
通过基因工程手段将 GFP 编码基因稳定整合到细胞基因组中,使细胞持续表达 GFP。
应用:
可视化追踪:利用荧光显微镜直接观察细胞状态、分布或迁移(GFP 在 488 nm 激发光下发出绿色荧光)。
筛选与分选:结合流式细胞术(FACS)或荧光显微镜,快速筛选阳性转染细胞。
Puromycin(嘌呤霉素)抗性基因:
共转染或串联表达 Puromycin 抗性基因,使稳转株对 Puromycin 具有抗性。
作用:在细胞转染后,通过添加 Puromycin 进行药物筛选,淘汰未成功整合目的基因的细胞,确保存活细胞均为稳定转染株。
3. 构建流程与筛选
载体设计:
构建含 GFP 基因、Puromycin 抗性基因的表达载体(如质粒),通常带有真核生物启动子(如 CMV 启动子)驱动基因表达。
转染:
使用脂质体转染、电穿孔等方法将载体导入 HEK-293A 细胞。
药物筛选:
转染后 48⁻⁷2 小时添加 Puromycin(浓度需预实验优化,通常为 1-10 µg/mL),未整合抗性基因的细胞死亡,存活细胞形成单克隆。
单克隆鉴定:
通过有限稀释法或克隆环分离单克隆细胞,利用荧光显微镜检测 GFP 表达,Western blot 或流式细胞术验证表达水平。
稳定性验证:
传代培养多代(如 20 代以上),检测 GFP 表达和 Puromycin 抗性的稳定性。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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