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RT4-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
RT4-GFP-Puro稳转株
英文名称 | RT4-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1764 |
中文名称 | GFP 标记的 RT4 稳转株 |
Lot number | RT4-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | McCoy’s 5A + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
1. 基础概念
RT4 细胞：
源自人类膀胱移行细胞癌的永生化细胞系，具有上皮细胞形态，常用于泌尿系统肿瘤研究（如膀胱癌的发生机制、药物敏感性分析）。
特点：增殖能力较强，易于培养，对某些化疗药物（如顺铂）敏感。
GFP（绿色荧光蛋白）：
作为报告基因，表达后可发出绿色荧光，便于通过荧光显微镜或流式细胞术实时观察细胞位置、形态及基因表达情况，广泛用于细胞追踪和蛋白定位研究。
Puro（嘌呤霉素）：
是一种抗生素，用于稳转株筛选。通过将携带嘌呤霉素抗性基因的质粒转入细胞，只有成功整合外源基因的细胞才能在含嘌呤霉素的培养基中存活，从而筛选出稳定表达目标基因的细胞株。
2. 构建流程
载体构建：
将GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因插入到合适的质粒载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体）中，形成重组质粒。
载体需包含启动子（如 CMV 启动子）以驱动基因表达。
细胞转染 / 感染：
通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染（如慢病毒）将重组质粒导入 RT4 细胞。
筛选与鉴定：
加入嘌呤霉素进行筛选，未成功整合质粒的细胞死亡，存活细胞即为稳定表达 GFP 的 RT4 稳转株（RT4-GFP-Puro）。
通过荧光显微镜观察 GFP 表达效率，或通过 Western blot 检测 GFP 蛋白水平，验证稳转株的稳定性。
3. 应用场景
细胞追踪与成像：
利用 GFP 荧光标记，在活体或体外实时观察 RT4 细胞的迁移、侵袭过程，或与其他细胞 / 组织的相互作用（如肿瘤细胞与免疫细胞的互作）。
药物筛选与毒性评估：
在嘌呤霉素抗性筛选的基础上，可进一步引入其他目标基因（如耐药相关基因），用于筛选抗肿瘤药物或研究药物耐药机制。
通过 GFP 荧光强度变化间接反映细胞活性或药物对基因表达的影响。
基因功能研究：
作为基础模型，用于过表达或敲低特定基因（如与膀胱癌进展相关的基因），结合 GFP 标记追踪基因功能变化对细胞表型的影响（如增殖、凋亡、周期调控）。
肿瘤模型构建：
可将 RT4-GFP-Puro 细胞接种至动物体内（如裸鼠），建立荧光标记的膀胱癌移植瘤模型，通过活体成像技术监测肿瘤生长和转移。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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