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LNCaP clone FGC-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
LNCaP clone FGC-GFP-Puro稳转株
英文名称 | LNCaP clone FGC-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1746 |
中文名称 | GFP 标记的 LNCaP clone FGC 稳转株 |
Lot number | LNCaP clone FGC-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640＋10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
核心特征
1. GFP 标记（绿色荧光蛋白）
功能：通过基因转染技术将 GFP 基因整合到细胞基因组中，使细胞持续表达 GFP。GFP 作为报告基因，可通过荧光显微镜直接观察细胞形态、分布及存活状态，或用于细胞分选（如流式细胞术）、示踪细胞在体内外的行为（如迁移、侵袭）等。
应用场景：
实时监测细胞增殖、凋亡或药物处理后的动态变化。
在动物模型中追踪肿瘤细胞的转移路径。
2. 嘌呤霉素（Puro）抗性筛选
原理：稳转株构建过程中，通常会共转染 GFP 基因和嘌呤霉素抗性基因（如puroR）。通过在培养基中添加嘌呤霉素，未成功整合外源基因的细胞会被杀死，而稳定转染的细胞因携带抗性基因得以存活，从而实现阳性克隆的筛选。
优势：确保细胞群体中几乎所有细胞均表达 GFP，避免瞬时转染导致的表达不均一问题。
3. 克隆化（clone FGC）
含义：通过有限稀释法或单细胞分选技术获得单细胞来源的纯克隆，确保细胞群体遗传背景一致，避免异质性对实验结果的干扰。
意义：提高实验重复性，尤其适用于需要稳定表达特定基因的功能研究（如信号通路分析、药物敏感性测试）。
主要应用领域
1. 前列腺癌研究
作为模型细胞，用于探索前列腺癌细胞的增殖机制、侵袭能力、激素响应（如雄激素受体相关通路）等。
通过 GFP 标记，可直观观察肿瘤细胞与微环境的相互作用（如与免疫细胞的黏附、血管生成）。
2. 药物筛选与毒性评估
利用 GFP 荧光强度或细胞存活率（如 MTT、CCK-8 法结合荧光定量），快速评估抗癌药物对稳转株的抑制效果。
嘌呤霉素抗性可作为二次筛选标记，用于验证药物是否影响外源基因的稳定表达。
3. 细胞生物学基础研究
研究细胞周期、凋亡机制或蛋白亚细胞定位（如将 GFP 与目标蛋白融合，观察其在细胞内的分布）。
在共培养体系中，通过 GFP 颜色区分不同细胞群体（如与未标记细胞混合培养，分析细胞间通讯）。
培养与维护要点
1. 培养基与添加剂
基础培养基：通常使用 RPMI 1640 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 双抗（青霉素 + 链霉素）。
嘌呤霉素维持浓度：根据细胞状态调整，一般为 0.5~2 µg/mL（需提前通过杀伤曲线确定最低有效浓度，避免毒性积累）。
2. 细胞传代与观察
当细胞密度达 80%~90% 时传代，消化液用 0.25% 胰酶 - EDTA，避免过度消化导致 GFP 表达受损。
定期通过荧光显微镜检查 GFP 表达效率，若荧光强度显著下降，可能需重新筛选或优化培养条件。
3. 冻存与复苏
冻存液：建议使用 90% FBS+10% DMSO，或专用细胞冻存液。
复苏时注意快速解冻，避免长时间处于 4℃导致细胞损伤，复苏后可短暂提高嘌呤霉素浓度（如 2 倍维持浓度）以清除死亡细胞。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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