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JAR-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
JAR-GFP-Puro稳转株
英文名称 | JAR-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1791 |
中文名称 | GFP 标记的 JAR 稳转株 |
Lot number | JAR-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、核心组成与原理
JAR 细胞背景
来源：JAR 细胞是一种人胎盘绒毛膜癌细胞系，具有滋养层细胞特性，常用于胎盘发育、妊娠相关疾病（如子痫前期）或肿瘤研究。
特点：增殖能力强，易于培养，适合作为稳转株构建的宿主细胞。
GFP（绿色荧光蛋白）
功能：作为报告基因，表达 GFP 的细胞可通过荧光显微镜或流式细胞术直接观察和分选，用于追踪细胞内蛋白定位、细胞迁移或基因表达动态。
优势：荧光信号稳定，对细胞毒性低，适用于长期活体成像。
Puro（嘌呤霉素）
作用：作为筛选标记基因，赋予细胞对嘌呤霉素的抗性。在稳转株构建过程中，未成功整合目的基因的细胞会被嘌呤霉素杀死，从而筛选出稳定表达目标基因的细胞克隆。
二、构建流程与关键步骤
载体构建
将 GFP 基因和 Puro 抗性基因插入到合适的质粒载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体）中，通常与目的基因（如需研究的靶基因）共表达，形成 “报告基因 + 筛选标记” 的双标记系统。
细胞转染 / 感染
方法：通过脂质体转染、电穿孔或病毒感染（如慢病毒）将重组载体导入 JAR 细胞。
注意事项：病毒感染效率更高，尤其适用于难转染的细胞类型，需提前优化 MOI（感染复数）以避免细胞毒性。
嘌呤霉素筛选
浓度梯度确定：转染 / 感染后 48⁻⁷2 小时，加入递增浓度的嘌呤霉素（通常 1-10 µg/mL）进行筛选，直至未转染细胞全部死亡，获得稳定整合载体的单克隆细胞群。
单克隆化：通过有限稀释法或流式细胞分选（FACS）筛选单克隆细胞，确保稳转株的遗传稳定性。
鉴定与验证
荧光检测：通过荧光显微镜观察 GFP 表达，确认报告基因成功表达。
分子生物学验证：利用 qPCR、Western blot 检测目的基因的 mRNA 和蛋白表达水平，确保基因稳定整合且表达量一致。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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