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6-10b-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
6-10b-GFP-Puro稳转株
英文名称 | 6-10b-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1825 |
中文名称 | GFP 标记的 6-10b 稳转株 |
Lot number | 6-10b-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、命名解析
1. 载体名称（6-10b）
通常代表构建稳转株所使用的质粒载体编号或名称，不同实验室或公司对载体的命名规则不同，可能与载体的来源、序列特征或改造历史相关。例如：
“6-10b” 可能是某个基础载体（如 pLVX、pCDH 等）的衍生版本，携带特定的启动子、多克隆位点等元件。
部分载体名称会包含目标基因信息，但此处 “6-10b” 可能仅为载体编号，需结合具体研究背景判断。
2. 标记基因（GFP）
**GFP（绿色荧光蛋白）** 是一种常用的报告基因，其表达产物可在荧光显微镜下发出绿色荧光，用于：
可视化追踪：观察细胞中目标基因的表达位置和分布。
初步筛选：通过荧光信号快速识别成功转染的细胞（如流式细胞术分选）。
3. 筛选标记（Puro，嘌呤霉素）
Puro（Puromycin）是一种抗生素，可通过干扰核糖体功能杀死未成功整合外源基因的细胞。稳转株构建时，载体通常携带嘌呤霉素抗性基因（如 puroR），只有成功整合载体的细胞才能在含嘌呤霉素的培养基中存活，从而实现稳定转染细胞的筛选。
二、构建原理与流程
1. 原理
通过病毒载体（如慢病毒、逆转录病毒）或质粒转染，将包含目标基因、GFP 标记基因和嘌呤霉素抗性基因的表达载体导入宿主细胞。
载体中的抗性基因使细胞获得嘌呤霉素抗性，通过药物筛选（如添加嘌呤霉素）淘汰未成功转染的细胞，最终获得稳定整合外源基因并持续表达的细胞株。
GFP 标记用于辅助观察和验证基因表达，或通过荧光分选（FACS）进一步纯化稳转株。
2. 关键步骤
载体构建：将目标基因、GFP 和 puro 抗性基因克隆至载体（如 6-10b）中，形成重组质粒。
转染 / 感染：通过脂质体转染或病毒包装（如慢病毒）将重组载体导入宿主细胞（如 HEK293T、HeLa 等）。
药物筛选：使用嘌呤霉素处理细胞，未整合载体的细胞死亡，存活细胞形成稳转克隆。
单克隆筛选与鉴定：通过有限稀释法或流式分选获得单克隆细胞，利用荧光显微镜、Western blot 等验证 GFP 和目标基因的表达。
三、应用场景
基因功能研究
稳定表达目标基因或干扰 RNA（如 shRNA），用于长期观察基因对细胞增殖、凋亡、迁移等表型的影响。
GFP 标记可直观反映目标基因的表达水平和细胞定位。
药物筛选与毒性检测
构建携带报告基因的稳转株（如 GFP 标记的信号通路报告系统），用于高通量筛选调控特定通路的药物。
嘌呤霉素筛选确保细胞群中外源基因的稳定存在，避免瞬时转染的表达波动。
细胞示踪与成像研究
GFP 的荧光特性适用于活体成像、细胞迁移追踪等长期动态观察，例如在肿瘤研究中标记癌细胞以监测其在体内的扩散。
蛋白生产与分泌研究
稳转株可稳定表达重组蛋白（如抗体、细胞因子），用于工业生产或分泌机制研究，GFP 可辅助评估蛋白表达效率。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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