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TTA1-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
TTA1-GFP-Puro稳转株
英文名称 | TTA1-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1827 |
中文名称 | GFP 标记的 TTA1 稳转株 |
Lot number | TTA1-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、核心组成与功能
TTA1 基因
通常为目标基因（如特定功能蛋白编码基因），需根据研究目的选择。例如，若研究某信号通路，TTA1 可能是该通路的关键调控因子。
功能：通过过表达或敲降 TTA1，研究其对细胞增殖、凋亡、迁移等表型的影响。
GFP（绿色荧光蛋白）
标记物：GFP 作为报告基因，可使细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光，用于实时观察细胞状态、追踪细胞定位或分选阳性细胞（如流式细胞术）。
优势：直观性强，无需额外底物，对细胞毒性低。
Puro（嘌呤霉素）抗性基因
筛选工具：嘌呤霉素是一种抗生素，可杀死未成功导入质粒的细胞。稳转株构建时，通过在培养基中添加嘌呤霉素，筛选出稳定整合目的基因的细胞克隆。
二、构建原理与流程
载体构建
将 TTA1 基因、GFP 基因和 Puro 抗性基因插入到同一质粒载体中，形成重组表达载体（如慢病毒载体、逆转录病毒载体等）。
载体需包含启动子（如 CMV 启动子）以驱动基因表达。
细胞转染 / 感染
转染：适用于易转染的细胞（如 HEK293T），通过脂质体、电穿孔等方法将质粒导入细胞。
感染：若使用病毒载体（如慢病毒），需先包装病毒颗粒，再感染目标细胞（适用于难转染的细胞，如原代细胞）。
嘌呤霉素筛选
转染 / 感染后，细胞在含嘌呤霉素的培养基中培养，未成功整合质粒的细胞死亡，存活细胞即为稳定表达 TTA1-GFP 的单克隆稳转株。
单克隆筛选与鉴定
通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞，扩大培养后通过荧光显微镜观察 GFP 表达、Western blot 检测 TTA1 蛋白水平、qPCR 检测基因拷贝数等验证稳转株稳定性。
三、应用场景
细胞成像与动态追踪
利用 GFP 荧光，实时观察 TTA1 蛋白在细胞内的定位（如细胞质、细胞核或细胞膜）及动态变化（如细胞分裂、迁移过程中的分布）。
药物筛选与毒性分析
构建携带 TTA1 的稳转株细胞系，用于高通量筛选调控 TTA1 功能的小分子药物，或评估药物对细胞表型的影响（如增殖抑制率）。
基因功能研究
通过过表达或敲除 TTA1（结合 CRISPR 技术），分析其对细胞信号通路、代谢途径或疾病相关表型（如肿瘤细胞侵袭能力）的调控机制。
细胞分选与富集
利用流式细胞术（FACS）根据 GFP 荧光强度分选高表达 TTA1 的细胞亚群，用于下游实验（如单细胞测序、蛋白组学分析）。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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