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HDF-a-GFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
HDF-a-GFP-Puro稳转株
英文名称 | HDF-a-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1849 |
中文名称 | GFP 标记的 HDF-a 稳转株 |
Lot number | HDF-a-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本组成与特性
细胞背景
HDF-a：通常指人真皮成纤维细胞（Human Dermal Fibroblasts，HDF）的永生化或特定改造版本（如经病毒转化等），具有无限增殖能力，便于长期实验研究。
GFP：绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein），作为报告基因，表达后可使细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光，用于实时追踪细胞位置、观察细胞形态或监测基因表达情况。
Puro：嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因，赋予细胞对嘌呤霉素的耐药性，常用于稳转株筛选 —— 在培养基中添加嘌呤霉素可淘汰未成功整合目的基因的细胞，保留稳定表达 GFP 的阳性克隆。
核心特性
稳定表达：GFP 基因通过载体（如慢病毒、质粒）整合到细胞基因组中，可随细胞分裂稳定遗传，避免瞬时转染的表达时效性问题。
可筛选性：利用嘌呤霉素抗性高效筛选阳性细胞，确保群体中几乎所有细胞均表达 GFP，适合需要均一性荧光标记的实验（如细胞共培养、动物体内示踪）。
二、构建流程与技术要点
载体设计
构建含 GFP 基因和 Puro 抗性基因的表达载体（如质粒或病毒载体，常用慢病毒载体提高整合效率）。
载体需包含启动子（如 CMV 启动子）驱动 GFP 表达，并确保 Puro 抗性基因与 GFP 基因共表达（如通过 IRES 序列或双顺反子结构）。
细胞转染 / 感染
转染：对于易转染的细胞系，可通过脂质体或电穿孔法将载体导入 HDF-a 细胞。
感染：若细胞转染效率低，采用慢病毒或逆转录病毒包装系统，制备含目的基因的病毒颗粒，感染 HDF-a 细胞。
筛选与鉴定
嘌呤霉素筛选：转染 / 感染后 48⁻⁷2 小时，向培养基中添加嘌呤霉素（浓度需预实验优化，通常为 1-10 µg/mL），未成功整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞形成单克隆。
荧光检测：通过荧光显微镜或流式细胞术（FACS）验证 GFP 表达效率，确保阳性率接近 100%。
基因组鉴定：通过 PCR 或测序确认 GFP 基因整合到细胞基因组中。
三、典型应用场景
细胞示踪与迁移研究
在体外共培养体系或体内动物模型（如移植到免疫缺陷小鼠）中，利用 GFP 荧光追踪 HDF-a 细胞的迁移路径、分布及存活情况。
示例：研究成纤维细胞在伤口愈合模型中的迁移能力，或肿瘤微环境中基质细胞的分布。
基因表达与功能分析
将 GFP 与目的基因融合表达，通过荧光强度反映目的基因的表达水平，或利用 GFP 标签进行免疫共沉淀（Co-IP）等蛋白互作研究。
药物递送与疗效评估
作为模型细胞验证纳米药物载体的靶向性：GFP 标记的细胞与载药体系共孵育，通过荧光强度变化评估药物摄取效率。
在药物毒性实验中，结合流式细胞术分析 GFP 阳性细胞的存活率。
组织工程与再生医学
构建 GFP 标记的 HDF-a 稳转株用于组织构建（如皮肤等效物），通过荧光成像监测细胞在三维支架中的分布和分化状态。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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