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hCMEC/D3-RFP-Puro稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
hCMEC/D3-RFP-Puro稳转株
英文名称 | hCMEC/D3-RFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1854 |
中文名称 | RFP 标记的 hCMEC/D3 稳转株 |
Lot number | hCMEC/D3-10A2P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 梭状，细长型细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | ECM 培养基 + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
基本概念
hCMEC/D3 细胞系：hCMEC/D3 是永生化人脑微血管内皮细胞系，由人脑微血管内皮细胞通过含端粒酶逆转录 SV40T 慢病毒转染得到。该细胞系呈梭状、细长型，贴壁生长，具有接触抑制特性，在培养时表现出类似脑内皮细胞原代培养的形态和生长特点。
稳转株：是指将特定的基因片段（如质粒或慢病毒形式的基因载体）稳定地整合到细胞基因组中，使细胞能够稳定表达特定基因或蛋白的细胞株。通过使用相应载体中携带的抗性基因进行筛选，得到稳定转染的细胞群体，即稳转株。
hCMEC/D3-RFP-Puro 稳转株：是在 hCMEC/D3 细胞系的基础上，通过基因工程技术转染了带有红色荧光蛋白（RFP）基因和嘌呤霉素抗性（Puro）基因的载体，从而能够稳定表达红色荧光蛋白且对嘌呤霉素具有抗性的细胞株。
构建过程
载体选择与构建：选择合适的载体，如慢病毒载体，将红色荧光蛋白基因（RFP）和嘌呤霉素抗性基因（Puro）插入到载体中，构建成含有目的基因的重组载体。
细胞转染：采用适当的方法，如病毒感染或脂质体转染等，将重组载体导入 hCMEC/D3 细胞中，使载体进入细胞并将目的基因整合到细胞基因组中。
筛选与鉴定：使用含有嘌呤霉素的培养基对转染后的细胞进行筛选，只有成功整合了抗性基因并稳定表达的细胞才能在筛选压力下存活。通过荧光显微镜观察细胞是否表达红色荧光蛋白，以及采用分子生物学技术如 PCR、Western blot 等方法鉴定目的基因的整合和表达情况，从而获得稳定转染的 hCMEC/D3-RFP-Puro 稳转株。
应用领域
血脑屏障研究：hCMEC/D3 细胞系是常用的血脑屏障体外模型，hCMEC/D3-RFP-Puro 稳转株可用于研究血脑屏障的通透性、转运机制以及药物透过血脑屏障的能力等。红色荧光蛋白的表达有助于直观地观察细胞的形态、分布以及在共培养体系中与其他细胞的相互作用，同时利用嘌呤霉素抗性可维持细胞株的稳定性，便于长期研究。
神经科学研究：在神经退行性疾病、脑部炎症等研究中，该稳转株可用于探究内皮细胞在疾病发生发展过程中的作用机制，例如观察细胞对神经毒素、炎症因子的反应，以及研究细胞间信号传导通路等。
药物研发：可作为药物筛选的工具，用于评估药物对人脑微血管内皮细胞的毒性、药效以及药物在细胞内的摄取和分布等情况，为脑部疾病的药物研发提供重要的实验依据。
培养要点
培养基选择：一般使用含有 5% 优质胎牛血清（FBS）的内皮细胞培养基，如 PriMed-iCell-002 等，以满足细胞生长所需的营养物质和生长因子。
培养条件：气相为 95% 空气和 5% 二氧化碳，温度通常保持在 37℃，细胞贴壁生长，当细胞密度达到 70%-80% 以上时，可进行传代处理，传代比例一般为 1:2 至 1:5。
筛选与维持：在培养过程中，为了维持稳转株的稳定性，需要定期在培养基中添加适量的嘌呤霉素进行筛选，以去除未稳定转染的细胞。同时，要注意观察细胞的生长状态和荧光表达情况，确保细胞株的质量和特性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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