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详细内容
HNE-1-GFP-Puro稳转株
英文名称 | HNE-1-GFP-Puro polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H1940 |
中文名称 | GFP 标记的 HNE-1 稳转株 |
Lot number | HNE-1-10A1P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

HNE-1-GFP-Puro 稳转株概述
HNE-1 细胞是一种源自人鼻咽癌细胞的永生化细胞系,常用于肿瘤生物学、分子机制等研究。**GFP(绿色荧光蛋白)** 是常用的报告基因,通过基因工程手段将其导入细胞后,可借助荧光显微镜或流式细胞术等工具实时观察细胞状态、定位目标蛋白或追踪细胞行为。**Puro(嘌呤霉素)** 则是一种抗生素,常用于筛选成功转染外源基因的细胞 —— 含有 Puro 抗性基因的细胞可在含嘌呤霉素的培养基中存活,未成功转染的细胞则被淘汰。
HNE-1-GFP-Puro 稳转株即通过基因转染技术,将携带 GFP 基因和 Puro 抗性基因的表达载体稳定整合到 HNE-1 细胞基因组中,经嘌呤霉素筛选后获得的能够稳定表达 GFP 的细胞株。
主要特性与应用
1. 特性
荧光标记:持续表达 GFP,细胞在蓝光或紫外光激发下发出绿色荧光,便于直观观察细胞形态、分布或进行细胞分选(如流式细胞术)。
遗传稳定性:外源基因整合至基因组中,可在传代过程中稳定遗传,避免瞬时转染的荧光表达随时间衰减的问题。
抗性筛选:含 Puro 抗性基因,可通过嘌呤霉素维持细胞株的稳定性,防止未转染细胞过度生长。
2. 应用场景
细胞成像与追踪:在肿瘤迁移、侵袭实验中标记细胞,观察其在体内外的动态行为(如动物模型中的转移路径)。
基因表达研究:作为报告基因,验证外源基因的表达效率,或与目标基因构建融合蛋白,研究蛋白定位与功能。
药物筛选与毒性检测:通过荧光强度变化或细胞存活率评估药物对细胞的影响,结合嘌呤霉素筛选压力,分析药物与基因表达的协同作用。
细胞生物学基础研究:用于细胞周期、凋亡、信号通路等机制研究,借助荧光信号实时监测细胞状态变化。
构建流程(示意)
载体构建:设计含 GFP 基因、Puro 抗性基因及启动子的质粒载体(如 pEGFP-Puro)。
细胞转染:通过脂质体转染、电穿孔等方法将载体导入 HNE-1 细胞。
抗性筛选:转染后使用嘌呤霉素(浓度需预实验优化)处理细胞,未成功整合载体的细胞死亡,存活细胞形成克隆。
单克隆筛选与鉴定:通过有限稀释法或流式细胞术分选单克隆细胞,经荧光显微镜观察和 Western blot 验证 GFP 的稳定表达。
扩大培养与冻存:筛选出的阳性克隆扩大培养,液氮冻存备用。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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