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A549-RFP-Puro+ffluc单克隆株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
A549-RFP-Puro+ffluc单克隆株
产品名称 | A549-RFP-ffluc1-Puro 单克隆细胞株 |
产品货号 | XY-H2163 |
中文名称 | ffluc1 和 RFP 双标的 A549 单克隆细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转细胞株； （4）采用无限稀释法筛选单克隆细胞株； （5）单克隆细胞株质检（COA）。 |
完全培养基 | F-12K + 10 % FBS + 1 % P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |
1. 基本概念
A549 细胞：人非小细胞肺癌细胞系，常用于肿瘤研究、药物筛选等领域，具有贴壁生长特性，易于培养和操作。
RFP（红色荧光蛋白）：作为报告基因，表达后可使细胞发出红色荧光，便于通过荧光显微镜或流式细胞术等手段进行可视化追踪和分选。
Puro（嘌呤霉素）：一种抗生素，用于筛选成功转入含嘌呤霉素抗性基因载体的细胞。携带该抗性基因的细胞可在含嘌呤霉素的培养基中存活，未成功转染的细胞则被淘汰。
ffluc（萤火虫荧光素酶）：另一种报告基因，其催化的化学反应可产生生物荧光，常用于体内成像（如活体动物肿瘤模型），检测细胞增殖、转移或药物响应等。
单克隆株：通过单细胞克隆技术获得的纯细胞群体，确保所有细胞来源于单个亲本细胞，遗传背景一致，避免异质性干扰实验结果。
2. 构建流程与技术要点
载体构建：
将 RFP、ffluc 基因与嘌呤霉素抗性基因（如 PuroR）插入同一质粒载体，通常采用多顺反子结构（如 IRES 元件）实现共表达。
细胞转染：
通过脂质体转染、电穿孔等方法将载体导入 A549 细胞。
药物筛选：
转染后使用嘌呤霉素处理细胞，未整合抗性基因的细胞死亡，存活细胞为成功转染的阳性克隆。
单克隆化：
有限稀释法：将细胞悬液稀释至单细胞浓度，接种至 96 孔板，培养后筛选单克隆孔。
流式细胞分选（FACS）：利用 RFP 荧光标记，直接分选单细胞至孔板中。
验证：
荧光显微镜检测 RFP 表达均一性。
luciferase 活性检测（如 Luciferin 底物发光实验）验证 ffluc 功能。
遗传学鉴定（如 PCR 检测目的基因整合）。
3. 应用场景
肿瘤研究：
体内成像：通过 ffluc 检测小鼠移植瘤的生长、转移（需配合活体成像系统）。
细胞示踪：RFP 标记肿瘤细胞，观察其在组织中的分布和侵袭能力。
药物研发：
高通量筛选抗肿瘤药物，通过荧光强度或 luciferase 活性变化评估药物对细胞增殖的抑制效果。
机制研究：
分析信号通路或基因功能时，利用单克隆株的均一性排除细胞异质性干扰。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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