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HEK-293A-Puro+ffluc稳转株
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:48:35
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详细内容
HEK-293A-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | HEK-293A-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2397 |
中文名称 | ffluc 标记的 HEK-293A 稳转株 |
Lot number | HEK-293A-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | （1）构建目的基因过表达慢病毒重组质粒，并包装慢病毒； （2）慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞； （3）用最佳浓度药物对细胞株进行筛选，获得混合稳转株； （4）稳转株质检（COA）。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 1% P/S（选择添加） |
培养条件 | (1) 气相：95%空气，5% CO2；(2) 温度：37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
一、基本概念
1. 背景与来源
HEK-293 细胞：
人胚肾 293 细胞（Human Embryonic Kidney 293 Cells）是一种常用的哺乳动物细胞系，源自人胚胎肾组织，具有贴壁生长、易转染、蛋白表达效率高等特点，广泛应用于基因表达、病毒包装、蛋白生产等领域。
HEK-293A：
是 HEK-293 细胞的一个亚克隆（如通过克隆筛选获得），可能具有更稳定的遗传背景或更适合特定应用（如病毒载体生产）的特性。
稳转株（Stable Cell Line）：
通过基因工程手段将外源基因（如荧光素酶基因、抗性基因等）稳定整合到细胞基因组中，使细胞能够长期稳定表达目标基因的细胞株。
Puro+ffluc：
Puro：嘌呤霉素（Puromycin）抗性基因，用于稳转株筛选（含该基因的细胞可在嘌呤霉素存在的培养基中存活）。
ffluc：萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）基因，常用于报告基因检测、细胞示踪、体内成像等。
2. 核心特性
抗性筛选标记：表达嘌呤霉素抗性蛋白，可通过嘌呤霉素筛选维持稳转株的稳定性。
报告基因表达：组成型或诱导型表达萤火虫荧光素酶，可通过荧光素酶检测试剂盒（如 Luciferase Assay）定量检测基因表达水平，或通过活体成像技术（如小动物成像系统）追踪细胞在体内的分布和增殖。
细胞形态与生长特性：贴壁生长，倍增时间约 24-48 小时，培养条件与普通 HEK-293 细胞类似（需含胎牛血清的培养基，37℃、5% CO₂环境）。
二、构建流程
载体构建：
构建含 ffluc 基因 和 Puro 抗性基因 的重组质粒（如慢病毒载体、质粒载体等），通常带有真核生物启动子（如 CMV 启动子）驱动基因表达。
细胞转染：
通过脂质体转染、电穿孔等方法将重组质粒导入 HEK-293A 细胞。
抗性筛选：
转染后使用嘌呤霉素处理细胞，未成功整合质粒的细胞死亡，存活细胞形成稳转克隆。
单克隆筛选与鉴定：
通过有限稀释法或流式细胞术筛选单克隆细胞，利用荧光素酶活性检测验证 ffluc 基因的稳定表达。
扩大培养与冻存：
鉴定合格的单克隆细胞扩大培养，冻存于液氮中备用。
三、应用场景
基因表达与调控研究：
作为报告基因系统，分析启动子活性、转录因子功能或药物对基因表达的影响（通过荧光素酶活性变化反映）。
病毒载体生产：
HEK-293 细胞常用于慢病毒、腺病毒等载体的包装，稳转株可稳定表达病毒包装所需的辅助蛋白（如 ffluc 标记的病毒载体可追踪感染效率）。
体内成像与肿瘤研究：
将稳转株注射至动物模型（如裸鼠），通过荧光素酶底物（如荧光素，Luciferin）发光成像，监测肿瘤生长、转移或药物治疗效果。
蛋白生产与分泌研究：
若 ffluc 基因与分泌信号肽融合，可用于分析蛋白分泌路径或优化分泌型蛋白的生产工艺。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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