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143B-Puro+ffluc稳转株
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详细内容
143B-Puro+ffluc稳转株
英文名称 | 143B-Puro+ffluc polyclonal stable cell line |
产品货号 | XY-H2436 |
中文名称 | ffluc 标记的 143B 稳转株 |
Lot number | 143B-24D3P |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 混合型细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转株; (4)稳转株质检(COA)。 |
完全培养基 | MEM + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |

细胞背景:143B 细胞是一种人骨肉瘤细胞,具有上皮细胞样形态,呈贴壁生长特性。其培养条件一般为气相 95% 空气、5% 二氧化碳,温度 37℃,常用 H - DMEM 培养基添加 10% 胎牛血清和 1% 双抗进行培养。
构建原理:通常是利用慢病毒感染等方式,将含有目的基因(ffluc)以及抗性基因(Puro,即嘌呤霉素抗性基因)的载体导入 143B 细胞。载体进入细胞后,会将其携带的 DNA 序列整合到 143B 细胞的基因组中。随后,使用嘌呤霉素进行筛选,只有那些成功整合了载体 DNA、表达出嘌呤霉素抗性蛋白的细胞才能在筛选中存活下来,这些细胞就构成了稳定转染的细胞群体,即 143B - Puro + ffluc 稳转株。
抗性基因作用:Puro 作为抗性基因,使稳转株细胞具有对嘌呤霉素的抗性。在细胞培养过程中加入嘌呤霉素,未成功转染载体的细胞会因缺乏抗性而死亡,从而筛选出稳定表达目的基因的细胞株。
目的基因 ffluc:ffluc 通常指萤火虫萤光素酶基因。该基因表达的萤火虫萤光素酶可以催化萤光素氧化反应,在有 Mg²⁺、ATP 和氧分子存在的条件下,发出最强波长在 560nm 左右的生物萤光。这一特性可用于多种实验检测,比如通过检测萤光强度来反映目的基因的表达水平,或者用于研究基因调控、信号通路等。例如,将启动子区域序列插入 ffluc 表达框的上游,通过转录起始条件的变化造成其报告萤光的变化,进而分析启动子活性。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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