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SW1088-ffluc2-GFP-Puro稳转细胞株
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详细内容
SW1088-ffluc2-GFP-Puro稳转细胞株
产品名称 | SW1088-ffluc2-GFP-Puro 稳转细胞株 |
产品货号 | XY-H2607 |
中文名称 | ffluc2 和 GFP 双标的 SW1088 稳转细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转细胞株; (4)稳转细胞株质检(COA)。 |
完全培养基 | L-15 + 10% FBS + 1% P/S(选择添加) |
培养条件 | (1) 气相:空气,100 %;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |

一、基本信息
1. 细胞株背景
来源:
基础细胞株 SW1088 是人源恶性胶质瘤细胞株,来源于中枢神经系统肿瘤,常用于神经肿瘤学、癌症生物学等研究。
通过基因工程手段构建为 稳转细胞株,即通过病毒感染或转染等方式,将外源基因稳定整合到细胞基因组中,实现目的基因的持续表达。
标记基因:
ffluc2:萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)的优化版本,用于生物发光成像,可通过检测荧光信号定量细胞数量、监测肿瘤生长或药物疗效。
GFP:绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein),用于荧光显微镜观察或流式细胞术分选,直观追踪细胞分布或筛选阳性克隆。
Puro:嘌呤霉素抗性基因(Puromycin Resistance),用于稳转株筛选,通过嘌呤霉素药物压力淘汰未成功整合外源基因的细胞。
2. 关键特性
表达稳定性:外源基因(ffluc2、GFP)随细胞分裂稳定遗传,适用于长期实验(如体内成瘤实验、药物处理周期较长的研究)。
双标记系统:结合生物发光(ffluc2)和荧光(GFP)两种检测方式,兼容体外和体内研究(如小动物活体成像)。
耐药性:对嘌呤霉素(Puro)具有抗性,需在培养基中添加嘌呤霉素维持筛选压力(通常浓度为 1-5 µg/mL,需预实验优化)。
二、构建原理与流程
1. 载体设计
使用慢病毒载体或质粒载体,将 ffluc2、GFP 和 Puro 抗性基因 构建在同一表达框架中,通常由组成型启动子(如 CMV、EF1α)驱动表达。
载体结构示例:
plaintext
[启动子] → ffluc2 → IRES/2A肽 → GFP → [终止子]
[启动子] → Puro抗性基因 → [终止子]
(IRES 或 2A 肽元件确保多基因共表达)
2. 转染与筛选
转染:通过慢病毒感染(适用于难转染细胞)或化学转染(如脂质体)将载体导入 SW1088 细胞。
筛选:转染后 48⁻⁷2 小时加入嘌呤霉素,未整合抗性基因的细胞死亡,存活细胞形成稳转克隆。
单克隆鉴定:通过有限稀释法或流式分选获得单克隆细胞,利用荧光显微镜和 Luciferase 活性检测验证 ffluc2 和 GFP 的表达水平。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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