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NIH-3T3-Puro+ffluc稳转株
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详细内容
NIH-3T3-Puro+ffluc稳转株
产品名称 | NIH/3T3-ffluc2-Puro 稳转细胞株 |
产品货号 | XY-M1258 |
中文名称 | ffluc2 标记的 NIH/3T3 稳转细胞株 |
细胞规格 | 复苏细胞 (T25细胞瓶) 或1 × 106 细胞冻存细胞 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞株 构建流程 | (1)构建目的基因过表达慢病毒重组质粒,并包装慢病毒; (2)慢病毒以合适的MOI值转导靶细胞; (3)用最佳浓度药物对细胞株进行筛选,获得混合稳转细胞株; (4)稳转细胞株质检(COA)。 |
完全培养基 | DMEM-H + 10% FBS + 10% NEAA + 1%丙酮酸钠 + 10%谷氨酰胺 |
培养条件 | (1) 气相:95%空气,5% CO2;(2) 温度:37 ℃。 |
细胞冻存 | 无血清冻存液 |
存储条件 | 液氮 |
共享方式 | 公益性共享 |

基本概念
NIH-3T3 细胞系:NIH-3T3 是由美国国立卫生研究院(NIH)建立的小鼠胚胎成纤维细胞系,具有高度接触抑制性,在实验室中常用作转染及基因表达研究的宿主细胞。
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稳转株:即稳定转染的细胞株,是通过将外源 DNA 整合到宿主细胞基因组中,使细胞能够持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达的细胞株。
Puro:即嘌呤霉素(puromycin),在构建稳转株时,常将表达嘌呤霉素抗性基因的载体转染到细胞中,然后用嘌呤霉素进行筛选,只有成功整合了外源 DNA 并表达嘌呤霉素抗性蛋白的细胞才能在含有嘌呤霉素的培养基中存活,从而获得稳定转染的细胞株。
ffluc:通常指萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)基因,将其导入细胞后,细胞可表达萤火虫荧光素酶,在相应底物存在的情况下,能够发出荧光,可用于检测基因表达、细胞活性、信号通路激活等多种生物学过程。
构建方法
载体构建:将含有 ffluc 基因和嘌呤霉素抗性基因的表达载体进行构建,通常使用质粒载体或病毒载体,如慢病毒载体。
转染或感染:采用合适的方法将构建好的载体导入 NIH-3T3 细胞中,常用的方法有脂质体转染法、电穿孔法或病毒感染法等。若使用慢病毒载体,则通过慢病毒感染 NIH-3T3 细胞,使载体中的外源 DNA 进入细胞并整合到基因组中。
筛选稳定表达细胞株:转染或感染后的细胞在含有嘌呤霉素的培养基中进行筛选培养,未成功整合外源 DNA 的细胞会因缺乏嘌呤霉素抗性而死亡,存活下来的细胞即为稳定表达 ffluc 基因且具有嘌呤霉素抗性的 NIH-3T3-Puro+ffluc 稳转株。
应用领域
基因表达调控研究:可通过检测 ffluc 的荧光强度来反映目的基因的表达水平,研究基因在不同条件下的表达调控机制,如在不同刺激因子、不同细胞周期或不同生理病理状态下的表达变化。
信号通路研究:将 NIH-3T3-Puro+ffluc 稳转株用于研究特定信号通路的激活情况,例如,当信号通路被激活时,可能会影响 ffluc 基因的表达,通过检测荧光变化来分析信号通路的活性变化,以及上下游基因之间的调控关系。
药物研发与筛选:用于药物筛选和药效评价,观察药物对细胞内基因表达、信号通路的影响,以筛选出具有潜在治疗作用的药物分子,并研究药物的作用机制。还可以通过检测 ffluc 荧光强度来评估药物对细胞活性、增殖、凋亡等方面的影响。
细胞追踪与示踪:在体内或体外实验中,可利用 ffluc 的荧光特性对 NIH-3T3 细胞进行追踪,观察细胞的迁移、分布、增殖等行为,例如在肿瘤研究中,将稳转株注射到动物体内,通过活体成像技术观察肿瘤细胞的生长、转移情况。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。
以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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