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RIPA裂解液(高效)
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详细内容
RIPA裂解液(高效)
产品货号:XY9-32011
产品规格及价格:50ML/250元;100ML/340元
产品简介:
高效RIPA裂解液采用优质原料配制,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用,是经典常用的细胞组织快速裂解液。
高效RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品主要用于常规的Western、IP等下游实验。
可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。
还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
产品应用:
WB、IP 等
产品特点:
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便,将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法:
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4.如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
5.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
6.下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
A. 细胞裂解
1. 裂解液制备:
每 1ml 冷的 RIPA 裂解液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 5-10×106 个细胞,在 4℃,1000g 条件下离心 5-10 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 5×106 个细胞中加入 500ul 冷的裂解液,混匀后,在 4℃条件下振荡 15-20 分钟。
5. 在 4℃,12000-14000g 条件下离心 15 分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
B. 组织裂解
1. 裂解液制备:
每 1ml 冷的 RIPA 裂解液加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 100mg 组织样本用手术剪刀剪碎,加入 1ml 裂解液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆液在 4℃振荡 15-25 分钟。
4. 在 4℃,12000-14000g 条件下离心 15 分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
常见问题分析:
1.细胞裂解速度慢?
为了充分保证提取得到的蛋白的活性,提取液采用独特的保护蛋白的配方,裂解能力温和,下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
2.蛋白浓度低?
处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 A 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
3.用什么方法定量蛋白?
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法,因为试剂 A 中含有干扰 Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用 Bradford 法定量。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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