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活细胞/死细胞双染试剂盒(蓝色/红色荧光)
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详细内容
活细胞/死细胞双染试剂盒(蓝色/红色荧光)
产品货号:XY9-41267
产品规格及价格:500T/2000元;1000T/3300元
产品简介:
活细胞/死细胞染色试剂盒是采用 C04/PI 双色荧光染色细胞的方法区别活细胞和死细胞。
活细胞/死细胞染色探针采用公认的鉴别细胞内活力的参数酯酶活性和细胞膜完整性的方法检测活细胞和死细胞。
使用方法:
1. 试剂 A 母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。
2. 以下以培养细胞收集后染色为例。原位染色以染色液充分覆盖细胞样本即可。
3. 有效染色的前提是相应的细胞模型的活力变化是酯酶活性变化和质膜完整性变化这些物理和生化特性,不影响这些细胞特性的细胞毒性事件可能不能使用此方法进行准确评估。
染色工作液的配制:
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用染料稀释液试剂 C 将染色液 A 和 B 分别 10 倍稀释。
每 10ml HBSS 缓冲液或无血清培养基中加入 100µl 稀释过的染色液 A,充分混匀,即成染色工作液 A。
每 10ml HBSS 缓冲液或无血清培养基中加入 20-200µl 稀释过的染色液 B,充分混匀,即成染色工作液 B。
荧光显微镜观察:
1. 准备样本细胞。
2. 用 PBS 洗涤细胞 2-3 次。
3. 用 100-150µl 染色工作液 A 至盖玻片将细胞样品覆盖(或重悬)。
4. 在室温或 37℃避光孵育 20-45 分钟。
5. 用 PBS 洗涤细胞。
6. 用 100-150µl 染色工作液 B 至盖玻片将细胞覆盖(或重悬)。
7. 在室温或 37℃避光孵育 10-45 分钟。
8. 用 PBS 洗涤细胞。
9. 用荧光显微镜检测结果。最大激发为 490nm,最大发射波长为 515nm 和 617nm。
显微镜结果分析 :
荧光显微镜下,使用 354nm 波长激发,活细胞为蓝色。
用 488 或 545 nm 波长激发,能够看到红色的死细胞。
流式细胞仪检测:
1. 收集细胞。
2. 用 PBS 洗涤细胞两次。
3. 制备 1 mL 细胞悬浮液,浓度为 0.1 至 5×106 细胞/ mL。 细胞可以在无血清培养基或其它缓冲液中重悬。
4. 在室温或 37℃避光孵育 15-30 分钟。
5. 尽快用流式细胞仪检测结果。
荧光酶标仪检测:
1. 在微孔板中准备细胞样本孔以及对照孔。
2. 用 PBS 洗涤细胞 2-3 次。
3. 加入 200µl 染色工作液。
4. 在室温或 37℃避光孵育 15-45 分钟。
5. 用 PBS 洗涤细胞。
6. 加入适量 PBS。
7. 用荧光酶标仪/荧光光度计检测结果。最大激发为 354nm,最大发射波长为 441nm 和最大激发为488nm,最大发射波长为 617nm。
酶标仪结果分析 :
可以根据不同荧光强度来计算样品中活细胞和死细胞相对数量(以百分比表示),或者活细胞/死细胞的绝对数量。
% Live Cells =(F(441)sam – F(441)min)÷ (F(441)max – F(441)min)× 100%
% Dead Cells =(F(620)sam – F(620)min)÷(F(620)max – F(620)min)× 100%
常见问题分析:
1. 所有细胞都染上红色?
PI 浓度过高会导致活细胞也被染色,需要优化 PI 的使用浓度,稀释至仅对死细胞核染色,
而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。
2. 细胞被同时染上蓝色和红色?
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:活细胞,死细胞双染试剂盒,活细胞/死细胞双染试剂盒(蓝色/红色荧光)















