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Annexin V-APC / SYTOX Green 细胞凋亡检测试剂盒
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详细内容
Annexin V-APC / SYTOX Green 细胞凋亡检测试剂盒
产品货号:XY9-410343
产品规格及价格:50T/1800元;100T/2600元
产品简介:
Annexin V-APC/SYTOX Green 细胞凋亡检测试剂盒是基于荧光探针双染法设计的细胞凋亡检测工具,广泛应用于流式细胞术、荧光显微镜等平台,可快速、地区分活细胞、早期凋亡细胞与晚期凋亡 / 坏死细胞,在细胞生物学、肿瘤学、药理学(如药物毒性筛选)等领域应用广泛。
一、核心检测原理
该试剂盒的检测逻辑基于细胞凋亡过程中的两个关键生物学特征,通过两种特异性荧光探针的协同作用实现细胞状态的区分:
1. Annexin V-APC:识别早期凋亡细胞
Annexin V:一种钙依赖性磷脂结合蛋白,可特异性结合细胞膜表面外翻的磷脂酰丝氨酸(PS) —— 这是细胞发生早期凋亡的标志性事件(正常活细胞的 PS 仅存在于细胞膜内侧,凋亡启动后会外翻至外侧)。
APC(Allophycocyanin):一种红色荧光染料(激发波长~650nm,发射波长~660nm),作为 Annexin V 的标记物,使早期凋亡细胞呈现红色荧光信号。
2. SYTOX Green:识别晚期凋亡 / 坏死细胞
SYTOX Green:一种细胞膜非渗透性核酸染料(激发波长~504nm,发射波长~523nm)。正常活细胞或早期凋亡细胞的细胞膜完整性良好,染料无法进入;当细胞进入晚期凋亡(细胞膜完整性被破坏)或坏死(细胞膜直接破裂)时,染料可进入细胞并与 DNA 结合,使细胞呈现绿色荧光信号。
二、试剂盒主要组成成分
不同品牌的试剂盒成分略有差异,但核心组分一致,通常包含以下试剂(以 “适用于 100 次检测” 规格为例):
Annexin V-APC 标记液:已预先标记 APC 的 Annexin V 蛋白,需低温(-20℃)避光保存,避免反复冻融。
SYTOX Green 染料储备液:高浓度核酸染料,使用前需用缓冲液稀释至工作浓度(通常稀释比例 1:1000~1:5000),同样需避光保存。
Annexin V 结合缓冲液:含钙离子(Ca²⁺)的缓冲液(如 HEPES 缓冲体系),为 Annexin V 与 PS 的结合提供必要条件,使用前需平衡至室温。
阴性对照品(可选):未处理的正常细胞,用于设定流式细胞术的荧光阈值。
阳性对照品(可选):经凋亡诱导剂(如顺铂、星形孢菌素)处理的细胞,用于验证试剂盒有效性。
三、典型实验流程(以流式细胞术为例)
1. 样本准备(关键步骤)
贴壁细胞:用胰酶(不含 EDTA,避免影响 Ca²⁺浓度)消化,离心(300×g,5min)收集细胞,用 PBS 洗涤 2 次,去除残留胰酶。
悬浮细胞:直接离心收集,PBS 洗涤 2 次。
细胞浓度调整:用 Annexin V 结合缓冲液重悬细胞,调整浓度至 1×10⁶~5×10⁶ cells/mL(浓度过高易导致细胞聚集,影响检测结果)。
2. 荧光染色(避光操作)
取 100µL 调整好浓度的细胞悬液,加入到流式管中。
加入 5µL Annexin V-APC 标记液,轻轻混匀,室温避光孵育 10min。
加入 2µL 稀释后的 SYTOX Green 工作液(具体用量参考试剂盒说明书),轻轻混匀,室温避光孵育 5min。
孵育结束后,加入 400µL Annexin V 结合缓冲液,轻柔混匀(避免细胞破裂),立即上样检测(染色后 1h 内完成检测,防止细胞状态变化)。
3. 流式细胞术检测与结果分析
仪器设置:选择 APC 通道(检测红色荧光)和 FITC 通道(检测绿色荧光),以未染色细胞设定 “散射光阈值”(排除细胞碎片),以阴性对照设定 “荧光阴性门”。
结果解读:通过双参数散点图(APC 为 X 轴,SYTOX Green 为 Y 轴),可清晰观察到三个细胞群体:
左下象限(Q3):Annexin V⁻/SYTOX Green⁻ → 活细胞。
右下象限(Q4):Annexin V⁺/SYTOX Green⁻ → 早期凋亡细胞。
右上象限(Q2):Annexin V⁺/SYTOX Green⁺ → 晚期凋亡 / 坏死细胞。
左上象限(Q1):通常为细胞碎片或非特异性染色,需结合散射光排除。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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