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活细胞/死细胞双染试剂盒（Calcein-AM/PI）
价格：￥ 500T/800元；1000T/1300元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:46:42
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详细内容
活细胞/死细胞双染试剂盒（Calcein-AM/PI）
产品货号：XY9-4126
产品规格及价格：500T/800元；1000T/1300元
产品简介：
活细胞/死细胞染色试剂盒是采用Calcein-AM/PI双色荧光染色细胞的方法区别活细胞和死细胞。
活细胞/死细胞染色探针采用公认的鉴别细胞内活力的参数酯酶活性和细胞膜完整性的方法检测活细胞和死细胞。
活细胞的特征是无处不在的细胞内酯酶活性，Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM由于在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein，聚阴离子染料Calcein很好地保留在活细胞内，几乎无荧光的Calcein-AM转变为绿色荧光的Calcein，在活细胞中发出均匀的强绿色荧光。
与其它同类试剂（如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。Calcein的激发和发射波长分别为490 nm和515 nm。Calcein -AM仅对活细胞染色。
作为核染色染料的PI不能穿过质膜完整的活细胞的细胞膜，它可以穿过死细胞膜的受损膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而在死细胞中产生红色荧光(激发：488，545nm，发射：617 nm)。PI不会染色质膜完整的活细胞，仅对死细胞染色。
由于Calcein-DNA和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein, AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。
本染色方法适用于荧光显微镜、荧光酶标仪等微孔板荧光扫描设备、流式细胞仪或者其它的荧光设备。
本染色方法适用于大多数真核细胞，包括贴壁细胞和某些组织样本，单不包括细菌和酵母样本。
需要注意的是，Calcein-AM/PI双染有效染色的前提是相应的细胞模型的活力变化是酯酶活性变化和质膜完整性变化这些物理和生化特性，不影响这些细胞特性的细胞毒性事件可能不能使用此方法进行准确评估。
产品应用：
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
使用方法：
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.染色液 A 为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
3.微量试剂 A 为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5.由于 Calcein-AM 的工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
6.Calcein-AM 对湿度非常敏感，若是 Calcein-AM 溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
7.试剂 A 母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
8.以下以培养细胞收集后染色为例。原位染色以染色液充分覆盖细胞样本即可。
9.有效染色的前提是相应的细胞模型的活力变化是酯酶活性变化和质膜完整性变化这些物理和生化特性，不影响这些细胞特性的细胞毒性事件可能不能使用此方法进行准确评估。
染色工作液的配制：
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用染料稀释液试剂 C 将染色液 A 和 B 分别 10 倍稀释。
每 10ml HBSS 缓冲液或无血清培养基中加入 100µl 稀释过的染色液 A，充分混匀，即成染色工作液 A。
每 10ml HBSS 缓冲液或无血清培养基中加入 20-200µl 稀释过的染色液 B，充分混匀，即成染色工作液 B
荧光显微镜观察：
1. 准备样本细胞。
2. 用 PBS 洗涤细胞 2-3 次。
3. 用 100-150µl 染色工作液 A 至盖玻片将细胞样品覆盖（或重悬）。
4. 在室温或 37℃避光孵育 20-45 分钟。
5. 用 PBS 洗涤细胞。
6. 用 100-150µl 染色工作液 B 至盖玻片将细胞覆盖（或重悬）。
7. 在室温或 37℃避光孵育 10-45 分钟。
8. 用 PBS 洗涤细胞。
9. 用荧光显微镜检测结果。最大激发为 490nm，最大发射波长为 515nm 和 617nm。
显微镜结果分析 ：
荧光显微镜下，使用 488nm 波长激发，活细胞为黄绿色，死细胞为红色。
用 545 nm 波长激发，仅能够看到红色的死细胞。
流式细胞仪检测：
1. 收集细胞。
2. 用 PBS 洗涤细胞两次。
3. 制备 1 mL 细胞悬浮液，浓度为 0.1 至 5×106 细胞/ mL。 细胞可以在无血清培养基或其它缓冲液中重悬。
4. 在细胞中加入适量 Calcein-AM 溶液和适量 PI 母液，混匀。
5. 在室温或 37℃避光孵育 15-30 分钟。
6. 尽快用流式细胞仪检测结果。
荧光酶标仪检测：
1. 在微孔板中准备细胞样本孔以及对照孔。
2. 用 PBS 洗涤细胞 2-3 次。
3. 加入 200µl 染色工作液。
4. 在室温或 37℃避光孵育 15-45 分钟。
5. 用 PBS 洗涤细胞。
6. 加入适量 PBS。
7. 用荧光酶标仪/荧光光度计检测结果。最大激发为 490nm，最大发射波长为 525nm 和 617nm。
酶标仪结果分析 ：
可以根据不同荧光强度来计算样品中活细胞和死细胞相对数量（以百分比表示），或者活细胞/死细胞的绝对数量。
% Live Cells =（F(530)sam – F(530)min）÷ （F(530)max – F(530)min）× 100%
% Dead Cells =（F(620)sam – F(620)min）÷（F(620)max – F(620)min）× 100%
常见问题分析：
1.所有细胞都染上红色？
PI 浓度过高会导致活细胞也被染色，需要优化 PI 的使用浓度，稀释至仅对死细胞核染色，而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。
2.细胞被同时染上绿色和红色？
样本中有大量晚期凋亡细胞时，细胞胞浆会有 Calcein 着色并呈碎片状，而且 PI 也为阳性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：活细胞,死细胞双染试剂盒,活细胞/死细胞双染试剂盒（Calcein-AM/PI）
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