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Caspase 1 活性检测试剂盒-荧光
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详细内容
Caspase 1 活性检测试剂盒-荧光
产品货号:XY9-410612
产品规格及价格:50T/1400元;100T/2300元
产品简介:
Caspase-1 活性检测试剂盒(Caspase 1 Activity Assay Kit)是采用荧光法检测细胞或组织裂解液中Caspase 1活性或纯化的Caspase 1活性的试剂盒。
本Caspase 1 活性检测试剂盒是基于casepase 1可以催化Caspase-1荧光底物产生荧光产物AMC,AMC在360 nm激发,发射波长430 nm。生成的AMC量与caspase 1的活性成正比,从而可以通过测定荧光强度来检测caspase 1的活性变化。
本试剂盒可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-1检测。
还可以提供R110,AFC等荧光标记的Caspase-1活性检测试剂盒。没有荧光检测条件,可以选择的比色法Caspase-1活性检测试剂盒
产品应用:
荧光酶标仪

使用方法:
1. 37℃下反应如果颜色变化不明显,可以适当延长反应时间。
2.如果样品中蛋白含量低,加大样品量,裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到 200-500 ug 每样。
3.如果样品中激活的 caspase 水平很低,适当调节诱导细胞凋亡的时间,找一个 caspase 激活比较强的时间点进行检测。
4. Caspase-1 底物避光保存,使用过程中尽量避光。
5. 底物为 DMSO 溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。6. 使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。7. 酶标仪检测必须使用荧光检测专用的黑色 96 孔板。
一、 裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液,每 1 ml 缓冲液中加入 10 µl DTT。
充分混匀置冰上备用。
二、 样品处理 A.
细胞样品
1. 收集 5×106 个细胞,在 4℃,500×g 条件下离心 5 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细
胞。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入 50 µl 冷的裂解缓冲液,高速涡旋振荡 15 秒。
4. 置冰上持续振荡 20-45 分钟
5. 在 4℃,12000×g 条件下离心 15 分钟。6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,置于冰上保
存备用。
B. 组织样品
1. 取适量组织样本剪碎,按照每 50 mg/100 µl 冷的裂解缓冲液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可
见固体,冰上振荡 20-45 分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在 4℃,12000×g 条件下离心 5 分钟。
3. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
三、 对上述处理过的上清进行蛋白定量。
【注】:
1.必须进行蛋白定量,以保证后续步骤的蛋白上样量足够,否则容易出现检测不到结果的情况。
2.用 BCA 蛋白定量试剂盒进行定量的话,裂解液中不要加入 DTT。
四、 Caspase 1 活性检测
1、 取 50 µl 裂解上清(含 100-200 ug 蛋白),加入 45 µl 检测缓冲液。
2、 再加入 5 µl caspase-1 荧光底物,充分混匀,在 37℃下避光反应 1-2 小时。
【注】: Caspase-1水平较低时需要延长反应时间。
3、 荧光酶标仪检测荧光强度。Ex=360 nm,Em=430 nm。
4、 根据凋亡的细胞的荧光值与对照细胞样本的荧光值的比值计算相对的 Caspase 1 活性程度变化。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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