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活细胞/死细胞双染试剂盒（Calcein-AM/7-AAD）
价格：￥ 500T/900元；1000T/1400元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 10:46:42
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详细内容
活细胞/死细胞双染试剂盒（Calcein-AM/7-AAD）
产品货号：XY9-41262
产品规格及价格：500T/900元；1000T/1400元
产品简介：
活细胞/死细胞染色试剂盒是采用Calcein-AM/7-AAD双染细胞的方法染色活细胞和死细胞。
Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM由于在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。Calcein的激发和发射波长分别为490 nm和515 nm。Calcein -AM仅对活细胞染色。
作为核染色染料的7-AAD不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发：488，546nm，发射：647 nm)，因此7-AAD仅对死细胞染色。
根据以上特点，Calcein, AM和7-AAD经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。
一般试剂盒采用PI与Calcein联用，但是由于PI的发射波长是<625nm,通常在FL2中检测,对FITC的干扰大。而且由于波谱较宽，同时在FL3中也能测，所以用了PI最多再加一个FITC，FL3就没法用了。PI还有一个重要的缺点是不容易清洗干净,使用后清洗流式细胞仪更加费时费物。
7-AAD/Calcein AM试剂盒有效的解决了这些弊端，7-AAD的发射波长是650nm,只占用FL3通道进行检测，FITC、PE两个通道受影响都小，可以做三色分析。
产品应用：
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
使用方法：
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.染色液 A 为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
3.试剂 A 为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5.由于 Calcein-AM 的工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
6.Calcein-AM 对湿度非常敏感，若是 Calcein-AM 溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
7.试剂 A 母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
1. 染色工作液的配制：
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用染料稀释液试剂 C 将染色液 A 和 B 分别 10 倍稀释。
用 HBSS 缓冲液或无血清培养基 100 倍稀释以上稀释过的染色液 A，充分混匀，即成染色工作液 A。
用 HBSS 缓冲液或无血清培养基 20 倍稀释以上稀释过的染色液 B，充分混匀，即成染色工作液 B。
2. 收集样本细胞。
3. 用 PBS 洗涤细胞两次。
4. 用 200ul Calcein-AM 染色工作液将细胞重悬。
5. 在 37℃避光孵育 15-30 分钟。
6. 用 PBS 洗涤细胞。
7. 用 200ul 7-AAD 染色工作液将细胞重悬。
8. 在室温或 37℃避光孵育 5-10 分钟。
9. 用 PBS 洗涤细胞。
10. 用适量 PBS 重悬细胞。
11. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。最大激发为 490nm，最大发射波长为 515nm 和47nm。
结果分析 ：
荧光显微镜下，使用 488nm 波长激发，活细胞为黄绿色，死细胞为红色。
用 546 nm 波长激发，仅能够看到红色的死细胞。
常见问题分析：
1.所有细胞都染上红色？
7-AAD 浓度过高会导致活细胞也被染色，需要优化 7-AAD 的使用浓度，稀释至仅对死细胞核染色，而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。
2.细胞被同时染上绿色和红色？
样本中有大量晚期凋亡细胞时，细胞胞浆会有 Calcein 着色并呈碎片状，而且 7-AAD 也为阳性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：活细胞,死细胞双染试剂盒,活细胞/死细胞双染试剂盒（Calcein-AM/7-AAD）
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