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FDA/PI双染细胞毒性检测试剂盒
价格：￥ 500T/900元；1000T/1400元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:06:33
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详细内容
FDA/PI双染细胞毒性检测试剂盒
产品货号：XY9-4217
产品规格及价格：500T/900元；1000T/1400元
产品简介：
FDA/PI双染细胞毒性检测试剂盒是利用细胞荧光染料FDA和PI对细胞进行染色，利用FDA标记靶细胞，PI标记死的靶细胞来区分不同的细胞，活的靶细胞成绿色，死的靶细胞成红色（和绿色），从而检测细胞毒性作用。
根据不同的实验方案设计，可以用来检测细胞活性/化合物的细胞毒性作用。也可以用来检测杀伤性T细胞或NK细胞介导的细胞毒作用。
FDA是一种可对活细胞进行荧光标记的染料，可以标记活体细胞。FDA是一种非荧光疏水性荧光素衍生物，它可以通过细胞膜。FDA在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，进入细胞内的FDA的AM部位能被细胞内酯酶水解高荧光产物荧光素的二乙酸酯基团。通过共价结合赖氨酸侧链的氨基而掺入细胞内的蛋白，且结合后发出强的绿色荧光。荧光素分子在具有完整膜的细胞中积累，因此绿色荧光可用作细胞活力的标记。不具有活性代谢的细胞可能不会积聚荧光产物，因此不会显示出绿色荧光。
FDA毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。
FDA/PI标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞毒性检测。
FDA标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=496 nm, λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为516nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。PI标记细胞呈红色荧光，流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为647nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL2 detection channel。
FDA标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞毒性外，还可单染后用于细胞增殖检测，或者用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。
产品应用：
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
使用方法：
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。
3.FDA 母液极易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。
4.冬天气温较低时 FDA 溶解液会凝固，可先在 37℃水浴至溶解液完全融解后再进行配制，配制过程中注意避免溶液凝固，保持温度至 FDA 溶解完全。
5.FDA 工作液应现配现用，不能提前配制，因为 FDA 吸水会分解，影响染色效果。
6.FDA 易被水解，在水溶液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。
7.FDA 标记细胞仅需 5-15 分钟即可完成。对于不同细胞，最佳标记时间需自行摸索。正式实验前，建议先做几个孔摸索染色浓度和加入 FDA 试剂后的培养时间。
8.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
9.以下实验步骤仅供参考，请根据实际的实验方案设计或参考相关文献为准。
10.必须设置全阴，FDA 单标，PI 单标的靶细胞的参照以设置流式。
11.可以使用以下方法来优化得到两种荧光染料的最佳工作浓度。1) 用 0.1%皂素或者 0.1-0.5%孵育细胞 10min，或者用 70%乙醇孵育细胞 30min，从而制备死细胞；2) 用 50 倍-100 倍稀释（试剂盒中的母液）的PI 溶液进行死细胞染色，以得到仅仅对细胞核染色，而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。3) 用 5000 倍-500倍稀释（试剂盒中的母液）的 FDA 进行死细胞染色，以得到不会对细胞质染色的最佳工作浓度。然后用此浓度进行活细胞染色，去观察是否活细胞能被染色。
细胞模型制备：
1. 收集待检测的靶细胞。
2. 进行相应的毒性药物处理或者效应细胞处理。
细胞 FDA 染色：
1. 根据需要检测的细胞样品数，用 HBSS 将 FDA 母液 500-4000 倍稀释，配制成 FDA 染色工作液。不同的细胞需要根据预实验结果确定最佳染色浓度。如果荧光强度弱，可以适当提高 FDA 的终浓度。如果背景太高，可以适当降低 FDA 的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。
2. 将培养好的待测靶细胞消化后收集，用 PBS 洗涤 2 次。
3. 将待测细胞用染色工作液重悬，至细胞浓度大约 107/ml。
4. 在 37℃培养箱中避光孵育 15-30 分钟。
5. 孵育结束，500 g 离心 5 分钟。
6. 移除上清液，再次缓慢加入 37℃预热的培养基或 HBSS 重悬细胞。
7. 重复（5），（6）步骤两次。
细胞检测：
1. 收集 FDA 孵育好的 HBSS 重悬细胞。
2. 在 500ul 细胞悬液中加入 10ul PI 染色液，混匀。
3. 在 2-8℃避光孵育 2-10 分钟。
4. 在 400g 离心 5 分钟收集细胞。
5. 用 500ul HBSS 或 PBS 重悬细胞。
6. 取 500ul 细胞悬液，用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
7. 根据流式结果计算死亡细胞百分率。被杀伤死亡的靶细胞被 PI 染上会出现在 FDA+PI+区域，未杀伤的在FDA+PI-区域，得出被杀伤的靶细胞的比例。用这个比例再计算毒性。
常见问题分析：
1.所有细胞都染上红色？
PI 浓度过高会导致活细胞也被染色，需要优化 PI 的使用浓度，稀释至仅对死细胞核染色，而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。
2.细胞被同时染上绿色和红色？
样本中有大量晚期凋亡细胞时，细胞胞浆会有 FDA 着色并呈碎片状，而且 PI 也为阳性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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