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Brdu
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详细内容
Brdu
产品货号:XY9-4261
产品规格及价格:100MG/600元
产品简介:
Brdu,也称为溴化脱氧尿苷,一种合成的胸苷类似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA中。从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂,凋亡等行为。
在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载,然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记,ICC或IHC法染色法显示增殖细胞。另外,还能同时结合其它细胞标记物,双重染色,来判断增殖细胞的种类,增殖速度等,对研究细胞动力学有着重要意义。
可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

使用方法:
1.使用方法需自行参考相关文献资料决定。请根据实验安排或参考文献使用。以下仅供参考。
根据需要使用。以下仅供参考。
1. Brdu 储存液的准备
用 1X PBS 充分溶解适量的 Brdu 配置 10 mg/ml 的母液,过滤除菌后,按照 0.5ml/管的量分装放在-20°C 或者-80°C 长期保存,避免反复冻融。Brdu 储存液再融化后,4°C 可稳定存放一周。
2. 体内 Brdu 标记
1) 腹腔注射法(常用):无菌的 10 mg/ml(溶于 DPBS)适合用于体内注射用。按照 100-200 µl(1-2 mg)
Brdu 的量腹腔注射到小鼠体内。注意:最短在注射后 0.5 h 后在小肠,胸腺和骨髓瘤处就能检测到 Brdu。而一般在注射后 24 h 内几乎所有组织都能检测到 Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。
2) 根据自身的实验体系,在合适的时间点处死动物,摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的 IHC 染色步骤。
3. 体外 Brdu 标记(培养原代细胞或者细胞系)
1) 在 96 孔板上按标准步骤进行细胞培养,培养时间一般为 1⁻⁷2 h;
2) Brdu 工作液的准备:用组织细胞培养液按照 1:30 的比例稀释储存液得到 1mM Brdu 工作液。然后取 10 µl 1 mM Brdu 溶液直接加入 1 ml 组织培养液即得到最终工作液。37°C 温热。
3) 按 100 µl/孔 Brdu 工作液的量进行细胞标记,37°C 孵育 60 min~过夜。同时设置非 Brdu 标记的细胞作为阴性对照。注意:最佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如,对于快速增殖细胞(如 HL-60)有效孵育时间为 30-45min;对于原代细胞(如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞)孵育时间可能需要 24 h。细胞密度不要超过 2x106 cells/ml。
4) 制备单细胞层玻片。
5) 将玻片置于 70%冰乙醇放在-20°C 下固定 20-30 min。
6) PBS 清洗细胞 3 次,每次 5min。
7) 加入 1.5M HCl 中室温孵育 30 min。
8) 吸去 HCl,PBS 清洗 2 次,每次 5min。
9) 进入后续 ICC 染色步骤。
4. 体外 Brdu 标记(组织薄片)
1) Brdu 工作液的准备:用组织细胞培养液按照 1:30 的比例稀释储存液得到 1mM Brdu 工作液。然后取 10 -20 µl 1 mM Brdu 溶液直接加入 1 ml 组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液(37°C 温热)完全浸泡组织。
2) 用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约 1 mm 厚,2 mm2 大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片,利于维持组织的活力。
3) 转移组织薄片至预装有 10 ml Brdu 标记液的 15 ml 离心管内。于 37°,CO2 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变,取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的(常用的为 2-4 h)。直接丢弃未用完的标记液。
4) 37°C PBS 清洗组织薄片,每次 5 min。
5) 使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
热门标签:溴化脱氧尿苷,Brdu













