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细胞膜蛋白/胞质蛋白/核膜蛋白分步提取试剂盒
价格：￥ 50T/1100元；100T/1800元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:06:33
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详细内容
细胞膜蛋白/胞质蛋白/核膜蛋白分步提取试剂盒
产品货号：XY9-31042
产品规格及价格：50T/1100元；100T/1800元
产品简介：
细胞膜蛋白/胞质蛋白/核膜蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
产品应用：
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA 等
产品特点：
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至 1 小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
使用方法：
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
提取液 B 在使用前须一直置于 2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
膜蛋白电泳时 loading buffer 应该避免煮沸。
膜蛋白电泳时可以提高 loading buffer 的 SDS 含量。
1. 提取液制备：
每 400 µl 冷的蛋白提取液 A/B/D 中都分别加入 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物和 2 µl 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取 5-10×106 个细胞，在 4℃，800×g 条件下离心 5-10 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 5×106 个细胞中加入 400 µl 冷的蛋白提取液 A，混匀后，在 4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细
胞，使细胞完全破裂。
5. 在 4℃，1000×g 条件下离心 5 分钟。
6. 将上清（I）吸入另一干净离心管，在沉淀中加入 100-200 µl 冷的提取液 B，高速涡旋振荡 15 秒，充分混匀。
7. 将混匀的提取液 B 置 4℃低速振荡 30-60 分钟。
8. 将提取液 B 在 37℃条件下水浴 10 分钟。
9. 将提取液 B 在 37℃下 1000×g -2000×g 力离心 5 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层为核内蛋白，下层是核膜蛋白约为 20-40 µl。小心移除上层，用 1-2 倍体积的冰冷的提取液 D 溶解下层即为细胞核膜蛋白。
10. 在步骤 6 中所得到的上清（I）中加入 5 µl 提取液 C，充分混匀。
11. 在 2-8℃振荡 20-30 分钟。
12. 在 37℃水浴 10 分钟。
13. 在 37℃下 1000×g 离心 3 分钟，此时溶液分为两层，上层是胞浆蛋白部分，下层部分（II）是细胞膜蛋白约为 40-50 µl。
14. 将上层小心吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
15. 用 50-150 µl 冰冷的提取液 D 溶解步骤 13 中的下层部分（II），即得细胞膜蛋白。
16. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析：
1.蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致核蛋白/膜蛋白浓度低。只要适当延长试剂 BC 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
膜蛋白丰度较低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大细胞的上样量。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法，因为试剂中含有干扰 Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用 Bradford 法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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