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真菌磷酸化蛋白提取试剂盒
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详细内容
真菌磷酸化蛋白提取试剂盒
产品货号:XY9-31052
产品规格及价格:50T/700元;100T/1100元
产品简介:
磷酸化是细胞信号传递系统的组成部分,在许多生命活动中扮演重要角色,如基因与代谢活动的调节,细胞分化,肿瘤形成,细胞周期现象,由生长因子和激素激发的信号传递等。
真菌磷酸化蛋白提取试剂盒适用于从各种真菌细胞和实体组织中提取磷酸化蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。
本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
产品应用:
磷酸化蛋白质谱,2-D,IEF,
WB,IP,EMSA 等
产品特点
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 7 种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法:
使用注意事项:
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
新鲜样本:
1. 提取液准备:
每 500 µl 冷的提取液 A 中加入 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取清洗干净的 100-200 mg 新鲜真菌组织/细胞样本用手术剪刀尽可能剪碎,加入 500 µl 提取液 A 后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3. 将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在 4℃振荡 30 分钟-1 小时。
4. 在 4℃,12000×g 条件下离心 10-15 分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到真菌蛋白。
6. 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
冻存样本:
1. 冻存样本参照上述样本步骤操作。
2. 冻存样本中直接加入 5-10 倍体积的蛋白提取液,振荡 30 分钟。
3. 在 4℃,12000×g 条件下离心 15 分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
5. 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析:
1.蛋白浓度低?
处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 A 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法,因为试剂 A 中含有干扰 Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用 Bradford 法定量。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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