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酵母内质网蛋白提取试剂盒（低速离心法）
价格：￥ 50T/1200元；100T/1900元
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 11:06:33
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详细内容
酵母内质网蛋白提取试剂盒（低速离心法）
产品货号：XY9-31683
产品规格及价格：50T/1200元；100T/1900元
产品简介：
内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。
传统的内质网蛋白提取方法需要采用较高的离心力或者采用密度梯度离心，对实验室离心机设备要求较高，对实验的操作细致程度要求较高。如果实验室没有能达到50000×g以上的离心力的设备，则没法进行提取。
酵母内质网蛋白提取试剂盒（低速离心法）只需要达到20000×g以内的离心力即可提取内质网蛋白，一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。
酵母内质网蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取内质网总蛋白。提取过程简单方便。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理）。
本试剂盒不能用于冷冻样品的内质网提取。
可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。
可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。
产品应用：
WB,IP 等
使用方法：
1.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4.如果是做核酸类下游应用，实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。
5.下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。
6.细胞采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
7.使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是内质网回收率可能会下降。
8.离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：g=r×1.118×10-5×rpm2（r为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米)例如:转速为3000 rpm，有效离心半径为10cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
1.提取液准备：每100 µl冷的蛋白提取液F中加入1 µl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液F，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。
以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2.酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3.用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
网提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
【注】：
酵母数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
5.在1000×g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。
6.用300 µl酵母洗涤液D重悬细胞，静置10分钟，离心收集酵母。
7.酵母沉淀物中加入500 µl酵母内质网提取液B，充分混匀。
【注】：
根据酵母细胞量调整提取液用量，一般加菌体体积的2-5倍均可。
按酵母菌体体积每100 µl或100 mg湿重菌体加入250-500 µl提取液。
8.在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。
【注】：
使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔10分钟用移液器吹打混匀。不同酵母样本需要的时间差异较大，根据下游细胞裂解的难易程度调整，如果下游试剂C处理后沉淀没有明显减少，需要延长此步骤处理时间。可以延长至2小时。
9.在2000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
10.沉淀用300 µl酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。
11.在沉淀中加入400 µl酵母内质网提取液C，充分混匀，用Dounce匀浆器匀浆20-30下。
【注】：
标准Dounce匀浆器用紧杵5-8次，松杵匀浆15-20次。
匀浆杵一个上下来回为一次。普通玻璃匀浆器匀浆一般也不超过30次，匀浆次数并非越多越好。
如果没有匀浆器，可以在加入试剂C以后在振荡器上振荡10-30分钟。用振荡器/摇床的较低转速，保持提取液有轻微晃动即可。没有振荡器的话，在4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
试剂C处理后沉淀应减少，否则振荡延长处理时间。
12.将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
13.将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
14.将上清在4℃，12000×g -20000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。。
15.在上清中加入100 µl试剂E，充分混匀。16.置2-8℃冰箱静置过夜。
【注】
静置保存时间不少于10小时。17.在4℃条件下，10000×g离心20-45分钟。18.小心移除上清，收集沉淀。
【注】：
尽可能吸干上清。
吸取时小心，防止吸掉沉淀。19.沉淀中加入20-50 µl冷的蛋白提取液F，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟。
【注】：
使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。20.在4℃，10000×g条件下离心10分钟。21.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到内质网蛋白。22.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：BB-3401。
蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
热门标签：酵母内质网蛋白提取试剂盒,低速离心法,酵母内质网蛋白提取试剂盒（低速离心法）
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