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肝组织蛋白提取试剂盒
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详细内容
肝组织蛋白提取试剂盒
产品货号:XY9-31228
产品规格及价格:50T/700元;100T/1100元
产品简介:
肝组织总蛋白提取试剂盒适用于从各种动物肝组织中提取总蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份,包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用其他货号的试剂盒。也可以将样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐柱脱盐处理)。
本试剂盒按每个处理样本50 mg肝组织计,如果需要处理大量的肝组织,将提取液按肝组织样本体积的1:5-10加入即可。每个50T试剂盒大约可以提取2.5 g肝组织样本的总蛋白。根据不同的样本类型,100 mg肝组织的总蛋白质产量大约为4-6 mg左右。
产品特点:
1. 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2. 提取过程简单方便,将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3. 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等

使用方法:
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. Western 实验内参可以选用 beta-actin、GAPDH、Tubulin。
6.如果是脂肪含量特别高的病理状态下的脂肪肝组织样本,可选用贝博高脂肪样本蛋白提取试剂盒
1. 提取液制备:
每 500 µl 冷的蛋白提取液中加入 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2.取50-100 mg肝组织样本用剪刀剪碎,加入500 µl总蛋白提取液,用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将肝组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中,在 4℃条件下振荡 20-30 分钟。
4. 在 4℃,12000×g 条件下离心 10 分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到肝组织总蛋白。
6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析:
1.蛋白浓度低?
处理部分肝组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.细胞裂解速度慢?
为了充分保证提取得到的蛋白的活性,提取液采用独特的保护蛋白的配方,裂解能力温和,下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
3.用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。
4.提取时出现胶状沉淀?
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验即可;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理,300w/10秒间隔10秒,超声3分钟,随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,不必进行超声处理。
5.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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