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革兰氏阳性菌表面蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)
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详细内容
革兰氏阳性菌表面蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)
产品货号:XY9-319946
产品规格及价格:50T/1000元;100T/1700元
产品简介:
革兰氏阳性细菌表面蛋白提取试剂盒(蛋白质组学实验适用)适用于从从各种革兰氏阳性细菌中高效而温和地抽提细胞壁及其表面的可溶性蛋白。提取过程简单方便。
本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份,不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份,得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响,基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。
本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF,可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移,因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析,蛋白质组学(proteomics)等相关研究。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白也可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定、质谱等下游蛋白研究实验。
产品特点:
1. 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2. 提取过程简单方便,将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3. 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法:
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5.离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM)两种表示方式,有些离心机设置有RPM和×g显示切换,但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算:g=r×1.118×10-5×rpm2(r为有效离心半径,即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度,单位为厘米)例如:转速为3000rpm,有效离心半径为10 cm,则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
1. 提取液制备:
将试剂 A1 和试剂 A2 混合,配成蛋白提取液 A,充分混匀备用。
每 500 µl 蛋白提取液 A 中加入 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 在 4℃, 10000×g 条件下将菌液离心 5min,弃上清,尽量吸干剩余液体,收集菌体。
3. 用 PBS 洗菌体一次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每 50-200 mg 湿重菌体样本加入 500 µl 蛋白提取液,吹打混匀,2-8℃振荡 15-30 分钟。
5. 在 4℃, 12000×g 条件下将提取液离心 10 分钟,将上清移入冷的干净离心管。即得到细菌壁表面蛋白样品。
6. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析:
1. 蛋白浓度低?
细胞壁表面蛋白丰度较低,需要足够的细胞量才可能得到足够的蛋白量,在条件允许的情况下,尽可能加大细胞的上样量。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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