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昆虫跨膜蛋白提取试剂盒
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详细内容
昆虫跨膜蛋白提取试剂盒
产品货号:XY9-31531
产品规格及价格:50T/900元;100T/1600元
产品简介:
昆虫细胞跨膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学方法的高产跨膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂,适用于从昆虫组织或培养细胞中温和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白复合物。用本试剂盒抽提和富集到的蛋白包括从分子量很小到很大的蛋白,单次跨膜至7次以上的蛋白,甚至一些大的蛋白复合物。提取过程简单方便,可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
产品应用:
WB,IP 等
产品特点:
1.使用方便,从昆虫细胞,组织中提取蛋白不需经过反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 7 种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法:
使用注意事项:
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4.下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
5.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
1. 提取液制备:
每 500 µl 提取液 A 中加入 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物,充分混匀后置冰上备用。
2. 取适量昆虫组织样本用手术剪刀尽可能剪碎,加入 500µl 冷的蛋白提取液 A,用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 匀浆后于一个预冷的干净离心管中在 2-8℃振荡 1-2 小时。
4. 将提取液在 2-8℃低温下 12000×g 离心 5 分钟,取上清。
5. 在上清中加入 10 µl 提取液 B,充分混匀。
6. 在 37℃水浴/气浴 10 分钟。
7. 在 37 1000×g ℃ 离心 3 分钟。
8. 此时溶液会分为 2 层,移除上层,小心吸取下层管底部大约 50 µl 液体。
9. 用 50-150 µl 冰冷试剂 C 稀释该溶液,即得跨膜蛋白样品。
10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析:
1.蛋白浓度低?
膜蛋白丰度比较低,在条件允许的情况下,需要尽可能加大细胞的上样量以提高膜蛋白浓度。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 A 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法,因为试剂 A 中含有干扰 Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用 Bradford 法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
4.膜蛋白电泳没有条带?
膜蛋白样品通常浓度较低,电泳前一定要进行蛋白定量,以保证电泳是蛋白上样量足够。
膜蛋白提取好后,用溶解液充分溶解后,可以超声处理一下,再进行蛋白定量。
蛋白加 Loading buffer 后可以不用煮沸,采用 50℃保温 30 分钟。
蛋白 Loading buffer 中 SDS 终浓度含量可以提高至 3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低,可以使用丙酮沉淀膜蛋白,再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中,一般可以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时采用低电压低电流电泳。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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