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昆虫核蛋白提取试剂盒
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详细内容
昆虫核蛋白提取试剂盒
产品货号:XY9-31263
产品规格及价格:50T/900元;100T/1600元
产品简介:
昆虫核蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种昆虫细胞和各种昆虫实体组织中提取核蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。制备的核蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用其他货号的试剂盒。也可以将样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐柱脱盐处理(
可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。
可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。
产品应用:
WB,IP 等
产品特点:
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度
时,背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶
抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含 7 种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法:
1.预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进
行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通
常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提
前预实验优化实验条件。
2.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
3.蛋白酶抑制剂在 2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
5.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
6.如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
7.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
8.下游实验如果是进行特定蛋白酶或
磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离
心时间。
细胞蛋白提取
1. 提取液准备:每 500 µl 蛋白提取液 B 中加入 2 µl 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
【注】:根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2. 取 5-10×106 个细胞,在 4℃,500×g条件下离心 2-3 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
【注】: 细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 5-10×106 个细胞中加入 400 µl 冷的提取液 A,高速涡旋振荡 15 秒或吹打混匀,置 2-8℃条件振荡 20-30 分钟。
【注】: 用振荡器/摇床的较低转速,保持提取液稍微晃动即可。没有振荡条件可以不振荡,稍微延长处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
5. 然后在 4℃,12000×g 条件下离心 10 分钟。
6. 沉淀用 PBS 洗涤一次,然后在 4℃,10000×g 条件下离心 5 分钟,弃上清。
7. 在沉淀中加入 100-200 µl 冷的提取液 B,高速涡旋振荡 5 秒。
【注】: 根据预实验后核蛋白浓度测定的情况,可调整使用量,一般在 50-200 µl。
8. 置 2-8℃条件振荡 30 分钟,至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
【注】:用振荡器/摇床的较低转速,保持提取液稍微晃动即可。
没有振荡条件可以不振荡,稍微延长
处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
9. 在 4℃,10000×g 条件下离心 5 分钟。
10. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
11. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接
用于下游实验。
【注】:建议用 BCA 法进行蛋白定量。 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。组织蛋白提取 1. 提取液制备:每 500 µl 蛋白提取液 B 中加入 2 µl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
【注】:根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
2.取适量昆虫组织样本,用手术剪刀尽可能剪碎,加冷 PBS,用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉
眼可见固体,冰上静置 3 分钟,将匀浆液吸入另一预冷的干净离心管。
【注】: 果蝇等小型昆虫可以剪碎后直接匀浆处理。 较大的昆虫需要去除翅膀、腿、甲壳等。
3. 在 4℃,500×g 条件下离心 3 分钟,弃上清。
4. 每 20-50 µl 沉淀体积中加入 200 µl 冷的提取液 A,高速涡旋振荡 15 秒或吹打混匀,置 2-8℃条件振荡 20-40 分钟。
【注】: 用振荡器/摇床的较低转速,保持提取液稍微晃动即可。
没有振荡条件可以不振荡,稍微延长处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。也可按组织重量计,每 20 mg 加 200 µl 提取液 A。
5. 然后在 4℃,12000×g 条件下离心 10 分钟。
6. 沉淀用 PBS 洗涤一次,然后在4℃,10000×g 条件下离心 5 分钟,弃上清。
7. 在沉淀中加入 100-200 µl 冷的提取液 B,高速涡旋振荡 5秒。
8. 置 2-8℃条件振荡 30 分钟。
【注】:用振荡器/摇床的较低转速,保持提取液稍微晃动即可。 没有振荡条件可以不振荡,稍微延长处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
9. 在4℃,10000×g 条件下离心 5 分钟。
10. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
11. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】:
建议用 BCA 法进行蛋白定量。蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
常见问题分析:
1.核蛋白浓度低?
核蛋白丰度较低,需要足够细胞数量提取,在条件允许的情况下,尽可能加大细胞量。注意用蛋白提取液 AB 处理时没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 AB 的处理时间即可。在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀,至无明显沉淀。
2.用什么方法定量蛋白?
建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法,因为试剂 B 中含有干扰 Bradford 法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用 Bradford 法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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